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(無題) 削除/引用 No.2487-4 - 2010/05/04 (火) 19:53:02 - あいうえお Exと1st Intronからの転写制御はエンハンサー的に働くと思います。 教科書的には、場所や向きは問われないので、例えば、ルシフェラーゼ遺伝子の 後ろに気になる配列をいれてしまうのも手かと。 イントロンのエンハンサー活性を調べている論文をいくつか調べてみては？

(無題) 削除/引用 No.2487-3 - 2010/04/30 (金) 08:49:47 - ？？？ ＞後で先輩からintronまで含めると、splicingが働き レポーターアッセイとして機能しないことがあると聞きました。 機能しないときに考えることでは？ 詳しい結果を見ていない他人が、 ＞際にアッセイを行うとコントロールとしてpGL-basic vectorを用いた場合と比べ、約50〜100倍ほどのluciferase活性が得られており、 それなりには機能しているとは思っているのですが、 とある書き込み以上の情報がないのに、作り替えた方がいいかどうかなんて わからないです。

(無題) 削除/引用 No.2487-2 - 2010/04/30 (金) 07:09:56 - ats intronにも転写活性「等」を制御する配列が含まれていることが多いので、intronを加えるのは問題ありません。むしろ好ましいでしょう。 しかし、正常にsplicingが起きるように組み込む必要があります。 具体的には、挿入した配列にはintron donor（exon-intron境界配列）がありますが、対になるintron acceptor（intron-exon(luciferase)境界配列）はありますか？ もし無いようなら、luciferaseコード領域の前に30bpほどの人工の共通配列を組み込んでください。

レポーターアッセイのコンストラクト 削除/引用 No.2487-1 - 2010/04/30 (金) 01:26:55 - 何年たっても素人 いつも大変参考にさせて頂いております。 最近、promega社のDual-Luciferase（R) Reporter Assay System を用いてレポーターアッセイを行っています。 ある遺伝子のプロモーター領域をクローニングして pGL3-basic vectorに挿入しようとしたのですが、 そのクローニング領域を1st exon上流約2000bpから 1st intron 約200bpまでとしてしまいました。 後で先輩からintronまで含めると、splicingが働き レポーターアッセイとして機能しないことがあると聞きました。 実際にアッセイを行うとコントロールとしてpGL-basic vectorを用いた場合と比べ、約50〜100倍ほどのluciferase活性が得られており、 それなりには機能しているとは思っているのですが、正確を期す為には intronを含まないコンストラクトに作り替えたほうが良いでしょうか？ 大変初歩的な質問で恐れ入りますが 何とぞ御教示お願い致します。

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