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腫瘍細胞のCFSEラベルについて トピック削除
No.2460-TOPIC - 2010/04/25 (日) 09:34:10 - にゃじ
いつもお世話になっております。
細胞増殖(細胞分裂回数)をFACSで測定するCFSEについて
質問致します。これまでにマウス、ヒトリンパ球をCFSE
ラベルしてCD3抗体・CD28抗体で刺激して分裂回数を測定
していました。
そこで、培養するだけで常に分裂している腫瘍細胞にCFSE
ラベルしても測定できるかやってみました。ラベルはリンパ球
と同様の方法で行い、測定しましたが、CFSE特有の分裂像は
観察することができませんでした。いくつかの細胞株で試し
ましたが、どれもうまくいきませんでした。
CFSEについて調べてみますと、細胞内のエステラーゼでCFSE
が分解されるようですが、リンパ球と腫瘍細胞ではエステラーゼ
活性が異なるということはあるのでしょうか。

宜しくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.2460-2 - 2010/04/25 (日) 14:18:40 - た
リンパ球の場合は、ex vivoでほとんどの細胞がrestingな状態ですので、細胞周期があらかじめ整っており、かつサイズも近いので、CD3+28刺激後、きれいにそろったdilutionが見られている可能性があります。

腫瘍は形が不整、ラベルの段階で、細胞周期もまちまちですので、近いサイズのものをソーティング、無血清培養で細胞周期を統一してからラベルするといいかもしれません。

腫瘍細胞のCFSEラベルについて 削除/引用
No.2460-1 - 2010/04/25 (日) 09:34:10 - にゃじ
いつもお世話になっております。
細胞増殖(細胞分裂回数)をFACSで測定するCFSEについて
質問致します。これまでにマウス、ヒトリンパ球をCFSE
ラベルしてCD3抗体・CD28抗体で刺激して分裂回数を測定
していました。
そこで、培養するだけで常に分裂している腫瘍細胞にCFSE
ラベルしても測定できるかやってみました。ラベルはリンパ球
と同様の方法で行い、測定しましたが、CFSE特有の分裂像は
観察することができませんでした。いくつかの細胞株で試し
ましたが、どれもうまくいきませんでした。
CFSEについて調べてみますと、細胞内のエステラーゼでCFSE
が分解されるようですが、リンパ球と腫瘍細胞ではエステラーゼ
活性が異なるということはあるのでしょうか。

宜しくお願いします。

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