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マウスの腸管にあるパイエル板細胞の取り方について トピック削除
No.2454-TOPIC - 2010/04/23 (金) 15:33:24 - 実験初心者
今度、マウスの腸管にあるパイエル板から細胞を取り出して
サイトカインの産生試験を行うことになりました。

主にT細胞を集めたいと思っています。
私が所属する研究室ではコラゲナーゼによって細胞をはがし、
ナイロン製のセルストレーナーで濾過して得られた細胞を
実験に用いているのですが、結果を見ますと、安定しておらず
個体差とは言い切れないほど毎回差が出ています。

そこで、いろいろ本や調べていたら、T細胞を取るのならば
物理的破砕法が効率的だとあったのですが、コラゲナーゼとは
どのように違うのでしょうか？

細胞を破壊する際、金属メッシュを用いて濾過をしている方法がが
いくつかあったので、金属メッシュを使おうと思っているのですが、
金属メッシュを販売しているメーカーが見当たりません。
ご存知の方がいらっしゃいましたら、教えていただけないでしょうか。

ちなみに、ナイロンのセルストレーナーではこの方法はできないのでしょうか？

初歩的な質問ばかりで申し訳ありませんが、よろしくお願いします。
　
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おっしゃるとおりです。 削除/引用
No.2454-6 - 2010/04/30 (金) 12:23:17 - I..H
＞TK-1さん

おっしゃるとおりです。
他にもいろいろ調べていた時に、「実験初心者」
のIDがあったので、違うほうがいいのかと思い、変えたのですが
それだと、誰だかわからなくなりますね。

考え不足で大変失礼いたしました。

(無題) 削除/引用
No.2454-5 - 2010/04/30 (金) 11:54:31 - TK-1
最近、同一人物が違う名前で投稿するパターンしばしば見受けられますね。

実験初心者、 I..H

匿名掲示板ですから、どんな名前で出てこようとかまいませんが、いろいろな方に善意で情報を提供してもらうんですから、せめて自分のidentityくらいは統一した方がいいじゃないですか。

(無題) 削除/引用
No.2454-4 - 2010/04/30 (金) 11:15:01 - I..H
返信遅くなって申し訳ありません。

＞なつかしいなあさん
以前にも同様の質問があったのですね。検索不足でした。。
ありがとうございます。


＞amiさん
いちど、洗浄一回で行ったときは遠心後、ふよふよした塊があって
失敗したと思ったのですが、脂肪がメッシュを通過して固まるという
こともあるのでしょうか?
一応そのまま細胞計測をしたときは、コラゲナーゼと同数くらいは
取れたのですが。。

以下が簡単ですが、操作内容です。

@断首して、血を抜いた後腸管をPBS上に摘出
APBS上で腸管を軽く洗ったあと、RPMI1640培地(10%FBS、1%PC/ST）上に移動。
Bパイエル板をはさみで切り出して、新しい培地に移す。
Cナイロンメッシュ上でパイエル板をつぶす。(１ｍLシリンジの柄を使用)
D培地を回収して遠心して(1000 rpm, 5 min.)細胞計測。

このDの時に、ふよふとしたくらげのような？塊が浮いてしまいました。
最初は細胞が固まったのかと思っていたのですが。。

後、先にメッシュ上で細胞をつぶして、細胞懸濁液をそのまま
ファルコンに回収しているのですが、回収する時だけ
メッシュを使用したほうがいいですか?

(無題) 削除/引用
No.2454-3 - 2010/04/29 (木) 02:27:22 - ami
パイエル板を米粒サイズで切り取って、そのまま培地かPBSの中に入れて、シリンジの柄の平らな方で押しつぶして、ナイロンのセルストレーナーに通します。で、脂肪を拾ってくることが多くて、それを除かないと細胞のViabilityが下がるので、2回くらい洗います。

コラゲナーゼもViabilityを大きく下げるのでばらつきの原因になりますし、脂肪が多いのもばらつきの原因になります。その辺注意すれば安定します。

Re:マウスの腸管にあるパイエル板細胞の取り方 削除/引用
No.2454-2 - 2010/04/28 (水) 21:38:49 - なつかしいなあ
昔、大学院の時にパイエル板細胞を取っていました。
下のトピにもありますが、金属メッシュはあまりお勧めしません。
私はパイエル板を腸から切り取り（米粒くらいの大きさで）、シャーレに入れて、PBSで1回洗い、ハサミでチョキチョキと細断し、細胞を滲出させるようにしていました。96ウエルプレートで増殖応答試験をしましたが、細胞数は十分取れていたと思います。頑張って下さい。

http://www.kenkyuu.net/cgi-biotech2/biotechforum.cgi?mode=view;Code=2446

マウスの腸管にあるパイエル板細胞の取り方について 削除/引用
No.2454-1 - 2010/04/23 (金) 15:33:24 - 実験初心者
今度、マウスの腸管にあるパイエル板から細胞を取り出して
サイトカインの産生試験を行うことになりました。

主にT細胞を集めたいと思っています。
私が所属する研究室ではコラゲナーゼによって細胞をはがし、
ナイロン製のセルストレーナーで濾過して得られた細胞を
実験に用いているのですが、結果を見ますと、安定しておらず
個体差とは言い切れないほど毎回差が出ています。

そこで、いろいろ本や調べていたら、T細胞を取るのならば
物理的破砕法が効率的だとあったのですが、コラゲナーゼとは
どのように違うのでしょうか？

細胞を破壊する際、金属メッシュを用いて濾過をしている方法がが
いくつかあったので、金属メッシュを使おうと思っているのですが、
金属メッシュを販売しているメーカーが見当たりません。
ご存知の方がいらっしゃいましたら、教えていただけないでしょうか。

ちなみに、ナイロンのセルストレーナーではこの方法はできないのでしょうか？

初歩的な質問ばかりで申し訳ありませんが、よろしくお願いします。
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