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大腸菌 トピック削除
No.2435-TOPIC - 2010/04/20 (火) 13:35:20 - 新４年生
lacプロモーターを組み込んだ、プラスミドを形質転換して、発現させようと考えているのですが、BL21(DE3)のようなコンピテントセルでも平気なのでしょうか？
いま、研究室にBL21(DE3)しかないようなので。


調べたところ、

「λDE3遺伝子上には lac UV5プロモーターの制御下にT7 RNAポリメラーゼ遺伝子が配置されています。このBL21(DE3)株に目的の蛋白質遺伝子を組み入れたT7プロモーター発現ベクターを導入すると、イソプロピル-β-D-チオガラクトピラノシド(IPTG）添加で、lac UV5プロモーターによりT7 RNAポリメラーゼが誘導され、このポリメラーゼがT7プロモーターからの目的蛋白質遺伝子の転写を引き起こし、これによりその目的蛋白質の強力な発現がおこなわれます。」

との記述があり、T7プロモータじゃないとダメかなと考えているですが。
　
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ありがとうございます。 削除/引用
No.2435-3 - 2010/04/20 (火) 14:25:02 - 新４年生
中年さん

あいがとうございます。

(無題) 削除/引用
No.2435-2 - 2010/04/20 (火) 13:50:43 - 中年
余分なタンパク質としてT7ポリメラーゼも同時に発現してしまいますが、lacプロモーター下流に組み込んだ遺伝子も発現するので問題ないと思います。

大腸菌 削除/引用
No.2435-1 - 2010/04/20 (火) 13:35:20 - 新４年生
lacプロモーターを組み込んだ、プラスミドを形質転換して、発現させようと考えているのですが、BL21(DE3)のようなコンピテントセルでも平気なのでしょうか？
いま、研究室にBL21(DE3)しかないようなので。


調べたところ、

「λDE3遺伝子上には lac UV5プロモーターの制御下にT7 RNAポリメラーゼ遺伝子が配置されています。このBL21(DE3)株に目的の蛋白質遺伝子を組み入れたT7プロモーター発現ベクターを導入すると、イソプロピル-β-D-チオガラクトピラノシド(IPTG）添加で、lac UV5プロモーターによりT7 RNAポリメラーゼが誘導され、このポリメラーゼがT7プロモーターからの目的蛋白質遺伝子の転写を引き起こし、これによりその目的蛋白質の強力な発現がおこなわれます。」

との記述があり、T7プロモータじゃないとダメかなと考えているですが。
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