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(無題) 削除/引用 No.241-7 - 2009/03/30 (月) 11:20:24 - つん 中年さま、atsさま、ありがとうございます。 キアゲンのMaxi使用です。 今回は糸くずのようなものができるほどは回収できていなかったのですが、 なんとか必要量は得られました。 室温で一晩放置するという方法は初めて知りました。 こちらで質問させていただくと、とても勉強になります。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.241-6 - 2009/03/28 (土) 17:06:37 - ats ひと晩ほど（３〜６時間以上）室温で放置しておくと、沈殿が見えてきます。塩も共沈殿している可能性が高いので、一度TE(500uLほど）に溶解させ、エッペンチューブに移し3M NaOAc,EtOHを加えて遠心、70%EtOHリンス、再度TEに溶解して使っています。

(無題) 削除/引用 No.241-5 - 2009/03/27 (金) 16:47:45 - 中年 QiagenのMaxiでしょうか。カラムのキャパシティに近い十分量のプラスミドが取れて入れば、イソプロパノールを加えた時に糸くずのようなDNAが観察できるので、多少の（１割程度？）のロスはあってもほとんどは回収できると思います。収率の低いときはこの限りではありません。

(無題) 削除/引用 No.241-4 - 2009/03/27 (金) 16:42:45 - つん さっそくのご回答ありがとうございます。 イソプロを加える段階では50mlチューブを使用しています。 使用可能な遠心機は、細胞培養で使用しているもので、高速ではまわせません。 マイクロチューブ用なら高速の遠心機がありますが、 そうすると100本近くになってしまうので、無理そうです。 急ぎだったので、とりあえずできる範囲の最高回転数でまわし続けてみました。 マニュアルどおりにやったときよりは少ないですが、 ペレットが確認できたのでなんとかなりそうです。 次回はフィルターの使用を検討してみたいと思います。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.241-3 - 2009/03/27 (金) 16:14:03 - あべちゃん フィルターを通して、イソプロ沈ステップをぶっ飛ばす方法もありますよね。 僕は使ったこと無いですが。 使った人の話では、ややロスが多いとのことです。 でも、ラージスケールに用いる遠心機がないのであれば、選択肢として良いんじゃないですか？

(無題) 削除/引用 No.241-2 - 2009/03/27 (金) 15:57:39 - Pumpkin どうなんでしょう。さすがに、1500gは。仮に良いとしても、やたら時間がかかるし、ラージプレップしているのだから回収量は重要なんですよね。回収できているかどうかの検討もだるいと思いますが。 250mLとか500mLとかの遠心ボトルでしょうか？50mL位のファルコンチューブに分注して、×gが得られる遠心機で分離することはできませんか？ ×gを満たせる遠心機がマイクロチューブにしか対応していないと厳しいですね。

遠心 削除/引用 No.241-1 - 2009/03/27 (金) 14:58:35 - つん ラージプレップをの際、DNAを溶出した後にイソプロパノールを加えて遠心しますが、 マニュアルには15000gで15分あるいは6000gで60分とあります。 6000gでまわせる遠心がありません。 1500gくらいが最高です。 低いgでも時間を長くすれば大丈夫だったりするのでしょうか？ 何かアドバイスがありましたらよろしくお願いいたします。

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