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(無題) 削除/引用 No.2406-7 - 2010/04/26 (月) 06:07:03 - Kazu 潅流法でしたか。私はStatic incubationの話をしていました。最初に低グルコースウェルにトランスウェルをおき、膵島を入れ、60分培養後、別の低ウェルに移し、さらに60分培養し、次に高のウェルに移します。この時点で、低のウェルの上清を回収し、低サンプルとします。高ウェルで60分培養後の上清を採取し、高サンプルとしていました。

(無題) 削除/引用 No.2406-5 - 2010/04/23 (金) 13:30:11 - Kazu こんにちは。もし膵島分離に問題があるなら、コラゲナーゼ処理は酵素によって違いはあるものの、通常は15分程度で、長時間消化するとアウトです。また遠心分離後の純度が低いとどんなアッセイでも結果はばらつきます。消化時間や純度はOKでしょうか？ また膵島をハンドピックされていますか？ハンドピックすれば、ばらつきは減ります。たまたまウェルに膵島がいない、あるいはいるけどばらばらになった断片のみでは、高濃度でも無反応ということもあります。大き目の膵島をピックアップすれば、高濃度で必ず反応します。 アッセイの部分ですが、私は24ウェルトランスウェルでやっていましたが、どのようにされていますか？あまり関係ないかもしれませんが、一旦lowのウェルに入れて、60分後に、別のlowのウェルに入れ替えていました。移す時に直前の培地を持ち込まないよう滅菌ガーゼにしっかり吸収させていました。

(無題) 削除/引用 No.2406-3 - 2010/04/22 (木) 23:31:25 - ami どこまで原因を詰められているか教えてください。

(無題) 削除/引用 No.2406-2 - 2010/04/22 (木) 22:35:46 - ピペド 問題点がまったくもって不明です。 異なる挙動の内容によって意味合いが異なりますし。 まずきちんとIsletは取れているのですか？

膵島のグルコース刺激によるインスリン応答性について 削除/引用 No.2406-1 - 2010/04/16 (金) 09:41:28 - myu はじめて投稿させていただきます。 現在、ラット及びマウスからCollagensase法を用いて単離した膵島を、 グルコースを添加した培地中でインキュベーションして、膵島から放出される インシュリン量をELISAで測定しているのですが、まったくといっていいほど 再現性が得られません。 毎回、異なる挙動を示したり、ばらつきも非常に大きいです。 色々と改善策を講じてみたのですが、再現性あるデータは得られませんでした。 同様の実験を実施している方がいらっしゃれば、アドバイスを頂きたく思います。

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