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申し訳ありません 削除/引用 No.2405-6 - 2010/04/17 (土) 00:37:29 - くろーにんぐ ほぼ初心者なので、教科書を読んでも理解できずに質問してしまいました。 もう少し勉強してから、踏み込んだ質問をしたいと思います。 今回の質問で、「そのままでは使えない」ということが理解できたので、勉強して解決しようと思います。

(無題) 削除/引用 No.2405-5 - 2010/04/16 (金) 09:20:06 - Easy? >T-Easyのcloningの場合はなぜその処理が必要ないのでしょうか？ そのキットに入っていたベクターが、どのような状態か理解していれば・・・ T-Easyってたぶんこれですよね？ http://www.promega.co.jp/Cre_Html.php?pGMPID=0813001

(無題) 削除/引用 No.2405-4 - 2010/04/16 (金) 09:17:00 - ザンギ ここには宿題を片付けたい専門学校生から研究もする臨床医まで、いろんな方が いらっしゃるのようですが．．． PCR酵素には増幅断片の末端に余分な塩基を追加してしまうものがあって、その 性質を逆手にとったのがT-easyなどの製品です。 なので、普通のベクターでもその考え方にそった修飾を加えれば同じように使え ますが、逆にいえばそのままでは使えないということです。

(無題) 削除/引用 No.2405-3 - 2010/04/16 (金) 00:32:05 - ｇｇｒ ヒント 1) ちゃんと勉強したい人 molecular cloningなどの本を読む 2) ちょっと勉強したい人 ○○実験ノートなどの実験マニュアルのなかのクローニング、サブクローニングの項を読む 3) めんどくさがり 各メーカーのHPでT4 DNA ligaseの取説をよむ http://www.toyobo.co.jp/seihin/xr/lifescience/tech/experiment/lifescience/img/test01.pdf

(無題) 削除/引用 No.2405-2 - 2010/04/16 (金) 00:01:09 - ami 詳しい方というかなんというか、、まずはどんな本でも１冊読んだほうがいいと思います。

クローニングについて 削除/引用 No.2405-1 - 2010/04/15 (木) 22:34:33 - くろーにんぐ いつも拝見して、参考にさせていただいています。 この度クローニングを久々におこなうことになりましたが、初歩的なことでつまづいています。 まわりも詳しくないので、途方にくれています。 以前T-Easyでのクローニングをしていたときには、kitのLigaseやbufferだけ使用してPCR産物を挿入していましたが、 他のvectorではLigaseとbufferのみでは挿入不可能でしょうか？ vectorを制限酵素でマルチクローニングサイトを切断し、DNAの末端もそれにあうように処理する必要があるのでしょうか？ だとしたら、T-Easyのcloningの場合はなぜその処理が必要ないのでしょうか？ 私の記憶が確かなら、bufferでの反応のみで一つの制限酵素でのサイトで切断されるようになっていると聞いた記憶があるのですが… もし、詳しい方がおられたら、ご指導お願いいたします。

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