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(無題) 削除/引用 No.2367-6 - 2010/04/10 (土) 12:54:13 - プロモ TK-1さん、うさん、コメントありがとう御座います。 ＞通常、細胞に特異的なプロモーターって、ある細胞に特異的に発現する遺伝子を調節している領域を同定するものですよ？ つまり最初にその細胞に特異的に発現している遺伝子（マーカー）を同定する。 この特異的な遺伝子が同定できたら、上流のpromoter, enhancerを探す。 これらをつなげたレポーターを細胞に発現させて、発現を確認する。 その後Transgenicマウスへ。 といった流れで宜しいでしょうか？ 私の場合最初の段階も明かではないですから、まずはMicroarrayなどでマーカーを探すところから始めないといけない。

(無題) 削除/引用 No.2367-5 - 2010/04/10 (土) 12:02:32 - う どうもやりとりに違和感があるので、一言。 通常、細胞に特異的なプロモーターって、 ある細胞に特異的に発現する遺伝子を調節している領域を同定するものですよ？ まずは特異的に発現している、マーカーを探す必要があります。 そして制御領域を探してトランスジェニックを作るのです。 全くの未知なら、その制御領域を探すだけでも、ちょっとしたテーマです。 ＞gene targetingでknock-inを作ることによって特異的な外来遺伝子発現が可能かもしれません。 そんなことをしたら、元々の発現している遺伝子はノックアウトされ、発現しなくなりますが？ それで異常が起きないのでしょうかね・・・。 生兵法は怪我のもとです。ちゃんと勉強しましょう。 羊土社の書籍を数々を眺めていたら、これだと思う本は自ずと見つかると思います。

(無題) 削除/引用 No.2367-4 - 2010/04/10 (土) 11:58:37 - TK-1 > これはPromoter領域にreporterを繋いで、細胞に入れて発現を見てやるということでしょうか？ promoterだけでtransgeneの発現が得られるとは限りません。enhancerが必要なことも多く、enhancerがpromoterからそれなりに離れて存在していることもよくあります。transient transfectionで当たりをつけて、あとはGFPなどのレポーターをつないだtransgenic constructを作ってmapしていくか、あるいはBAC reporterを作って、削っていくという方法もあります。 いずれにせよ、特異的なgeneがわかってないのであれば、無理な話です。

(無題) 削除/引用 No.2367-3 - 2010/04/10 (土) 10:40:43 - プロモ TK-1さん、ご回答ありがとう御座います。 ＞conventionalな方法ではreporterをつないだtransgenic constructを作って同定します。王道は無いです。 これはPromoter領域にreporterを繋いで、細胞に入れて発現を見てやるということでしょうか？ ＞もしmicroarrayなどの方法でその細胞に特異的に発現している遺伝子が同定できているのであれば、gene targetingでknock-inを作ることによって特異的な外来遺伝子発現が可能かもしれません。 残念ながらmicroarrayその他の網羅的な解析は行われていないです。 が、細胞の単離はできるので、自分でmicroarrayを行うというのは手ですかね。。。 それが一番早いかな。。。問題は金銭的な物ですが。 もしこの辺のことに詳しい本などをご存じでしたら教えて頂けると幸いです。

(無題) 削除/引用 No.2367-2 - 2010/04/10 (土) 02:09:44 - TK-1 > この場合その細胞に特異的なプロモーターが必要だと思うのですが、この細胞に特異的なプロモーターはまだ同定されていません。 > この領域は全く素人なのですが、一般的にはどのような方法で細胞特異的なプロモーターを同定するのでしょうか？ conventionalな方法ではreporterをつないだtransgenic constructを作って同定します。王道は無いです。 もしmicroarrayなどの方法でその細胞に特異的に発現している遺伝子が同定できているのであれば、gene targetingでknock-inを作ることによって特異的な外来遺伝子発現が可能かもしれません。

細胞特異的プロモーターの同定 削除/引用 No.2367-1 - 2010/04/09 (金) 16:08:26 - プロモ ある細胞に特異的に発現するトランスジェニックマウスを作りたいと考えています。 この場合その細胞に特異的なプロモーターが必要だと思うのですが、この細胞に特異的なプロモーターはまだ同定されていません。 この領域は全く素人なのですが、一般的にはどのような方法で細胞特異的なプロモーターを同定するのでしょうか？ ちなみにこの細胞の単離は可能です。 あと、もし外部の企業などでこれを請け負ってくれるところをご存じでしたら教えて頂けると助かります。 宜しくお願い致します。

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