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二重タグの選び方 トピック削除
No.2361-TOPIC - 2010/04/09 (金) 01:25:31 - imp
いつもお世話になっています。

タンパク質の精製でHis-tag精製ではバックグラウンドをどうしても取り除く事ができず、二重タグの使用を計画しています。

GST,MBP等の大きなタグ以外では、一般的にFLAGが使われている様ですが、FLAGはカラム等が凄い高いですよね…
ゲル(1ml)が3-4万位するようですが、多量に精製したい為相当な額になってしまいます。

皆さんはどの様なtagを使用しているのか参考にしたいので、教えて頂けないでしょうか?

よろしくお願いします。
 
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No.2361-8 - 2010/04/12 (月) 09:55:56 - けい
>DC様、Tb様

>個人的には、S-S結合により2量体化する事が安定性向上につながっているのでは?と思ってはいますが

私も二量体化は安定性への寄与があるような気もします。


>Fc融合タンパクの体内動態に関して、最近目にした論文、

早速読んでみようと思います。どうもありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.2361-6 - 2010/04/11 (日) 00:36:58 - Tb
> Fc融合でタンパク質の安定性が上がる、体内動態が良くなるという話しをよく聞くのですが、根拠となるような元論文をご存知でしたらお教えいただけないでしょうか?

Fc融合タンパクの体内動態に関して、最近目にした論文、
PMID: 20083659. Suzuki, T. et al. Importance of neonatal FcR in regulating the serum half-life of therapeutic proteins containing the Fc domain of human IgG1: a comparative study of the affinity of monoclonal antibodies and Fc-fusion proteins to human neonatal FcR.
に、FcRnとの結合の強さと体内動態安定性ある程度の関連性がある、これはendosomeからのrecyclingを助けているのであろう、というのがありました。
ちょっと思い出した程度で私も詳しくないですが・・・

(無題) 削除/引用
No.2361-5 - 2010/04/10 (土) 15:40:58 - DC
>けい様

>[Re:3] けいさんは書きました :

> Fc融合でタンパク質の安定性が上がる、体内動態が良くなるという話しをよく聞くのですが、根拠となるような元論文をご存知でしたらお教えいただけないでしょうか?

無責任な発言で申し訳ありませんが、安定性が向上するという話の元論文は存じ上げません。日常的なラボでの会話などでそのように言われているので、私自身がそう受け取っていたもので。
個人的には、S-S結合により2量体化する事が安定性向上につながっているのでは?と思ってはいますが・・・

(無題) 削除/引用
No.2361-4 - 2010/04/09 (金) 23:37:22 - imp
>>DCさん

ご返信ありがとうございます。
Ig-Fcというのは聞いた事がありませんでした。まだまだ勉強不足です。
早速チェックしてみます。ありがとうございました!

(無題) 削除/引用
No.2361-3 - 2010/04/09 (金) 10:27:25 - けい
>DC様

横から申し訳ありませんが、

>IgFc融合によりタンパクの安定性も上がりますし・・・

Fc融合でタンパク質の安定性が上がる、体内動態が良くなるという話しをよく聞くのですが、根拠となるような元論文をご存知でしたらお教えいただけないでしょうか?
探し方が悪いのか、以前探したときには見つけることができませんでした。
よろしくお願いします。

(無題) 削除/引用
No.2361-2 - 2010/04/09 (金) 10:19:11 - DC
Ig-Fcはいかがでしょう・・・?
Protein A/Gのみで精製出来るので安価にはなると思いますが・・・
ただ、これもtagと呼ぶには少々大きすぎるという問題点もありますが、
IgFc融合によりタンパクの安定性も上がりますし・・・

二重タグの選び方 削除/引用
No.2361-1 - 2010/04/09 (金) 01:25:31 - imp
いつもお世話になっています。

タンパク質の精製でHis-tag精製ではバックグラウンドをどうしても取り除く事ができず、二重タグの使用を計画しています。

GST,MBP等の大きなタグ以外では、一般的にFLAGが使われている様ですが、FLAGはカラム等が凄い高いですよね…
ゲル(1ml)が3-4万位するようですが、多量に精製したい為相当な額になってしまいます。

皆さんはどの様なtagを使用しているのか参考にしたいので、教えて頂けないでしょうか?

よろしくお願いします。

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