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DE52の洗浄方法 トピック削除
No.2353-TOPIC - 2010/04/07 (水) 18:17:11 - kazu
初めまして。

今回、イオン交換クロマトグラフィーに使用する樹脂の
洗浄方法についてお知恵を貸していただきたいと思います。

血清の精製に使用したDE52 (whatman) の樹脂(2kg使用)なのですが、
洗浄手順として

0.5N HCl 3,000mlで撹拌→Milli-Q 3,000ml→0.5N NaOH 3,000ml→
Milli-Q 3,000ml

の工程をブフナーロートを用いた吸引により
3-6回繰り返しています。

樹脂に蛋白質が残っているかの判断は、陰圧から常圧にした時に
吸引瓶に落ちてきた濾液に泡がほとんどできないという
ことで判断しています。

ところが酸・アルカリ洗浄を6回ほど繰り返しても
まだ泡が残ってしまっています。

この場合、HClとNaOHの濃度を1.0N以上まで上げればよいのか、
などと考えていますが、皆様のご意見・ご指摘をお願いしたい
とおもいますのでよろしくお願いいたします。
 
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ご回答ありがとうございます 削除/引用
No.2353-3 - 2010/04/07 (水) 19:16:15 - kazu
CMさん

貴重なご意見をありがとうございます。

早速濾液を280nmの波長で測定してみて、
ご指摘の通りのスケールでの洗浄を試してみたい
と思います。

(無題) 削除/引用
No.2353-2 - 2010/04/07 (水) 18:37:37 - CM
そのスケールでやったことはないですが、ゲル:washの比が小さすぎるようです。10倍量位で洗浄する必要があると思います。蛋白が出続けているかどうかは280nmの吸収をはかればすぐにわかりますよ。

DE52の洗浄方法 削除/引用
No.2353-1 - 2010/04/07 (水) 18:17:11 - kazu
初めまして。

今回、イオン交換クロマトグラフィーに使用する樹脂の
洗浄方法についてお知恵を貸していただきたいと思います。

血清の精製に使用したDE52 (whatman) の樹脂(2kg使用)なのですが、
洗浄手順として

0.5N HCl 3,000mlで撹拌→Milli-Q 3,000ml→0.5N NaOH 3,000ml→
Milli-Q 3,000ml

の工程をブフナーロートを用いた吸引により
3-6回繰り返しています。

樹脂に蛋白質が残っているかの判断は、陰圧から常圧にした時に
吸引瓶に落ちてきた濾液に泡がほとんどできないという
ことで判断しています。

ところが酸・アルカリ洗浄を6回ほど繰り返しても
まだ泡が残ってしまっています。

この場合、HClとNaOHの濃度を1.0N以上まで上げればよいのか、
などと考えていますが、皆様のご意見・ご指摘をお願いしたい
とおもいますのでよろしくお願いいたします。

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