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(無題) 削除/引用 No.2346-3 - 2010/04/06 (火) 01:32:47 - mm 私も同じようなことをやっているのですが、現在、His-tagged Proteinを発現させて、それをInteracting proteinとともにニッケルカラムで落としてこようとしてます。もともと、Flag-tagged proteinでM2Beadsでやっていたのですが、Large Scaleでやると無視できないほとのIgGがBeadsから外れてきます。 トピ主さんももう少し詳しい条件を書いて頂ければ、。。。

(無題) 削除/引用 No.2346-2 - 2010/04/06 (火) 00:53:03 - TK-1 IPの際に抗体をbeadsにcrosslinkして、eluteされにくくするのが常套手段かと思います。あと、もし抗peptide抗体(蛋白そのものやFlagなどのepitope tag）を使っているのであれば、抗原peptideを用いてeluteすることでIgGの持ち込みはほぼ無くすことが出来ると思います。

IP->LC/MS/MS 削除/引用 No.2346-1 - 2010/04/06 (火) 00:09:34 - ＴＳ いつも勉強させて頂いています。 あるタンパク質のリン酸化部位を同定するため、 細胞抽出液から、目的タンパク質を免疫沈降後、 LC/MS/MSに供しようと考えています。 しかしながら、目的タンパク質の分子量が50kDa付近であるため、 免疫沈降後、SDS-PAGEでバンドを切り出すと、 抗体のIgG-Heavy chainのノイズが入りそうな感じです。 このような場合、IgGを持ち越さない、あるいは持ち越しを極力減らす、対処法はありますでしょうか？ 免疫沈降を変性条件で行いたいため、 できれば、二次元で分離するのは避けたいと考えているのですが、 お知恵を拝借できればと思います。 よろしくお願いします。

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