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精製したタンパク質をリン酸化させる トピック削除
No.2302-TOPIC - 2010/03/26 (金) 15:13:58 - AI
精製したタンパク質をリン酸化させるキットはありますか?

具体的には、以下のようです。

Hisタグを付けたタンパク質Xを大腸菌に発現させてAKTAで精製しました。

タンパクXはある組織内ではリン酸化されており(タンパクX内の様々な箇所のセリン・スレオニンがリン酸化されています)、リン酸化されたタンパクXの活性を測定したいのです。

しかし精製したタンパクXはリン酸化されていません。

そこで、このタンパク質をキナーゼMixtureのようなものでいろいろな箇所のセリン・スレオニンにリン酸化させることはできないでしょうか?

何かご存知のことがあればよろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.2302-2 - 2010/03/26 (金) 15:43:17 - TS
キットというのがあるかわかりませんが、
In vitro kinase assayということを普通にやりますから、MC-tubeでリン酸化することはもちろんできますよ。

生体内での責任キナーゼがわかっていれば、
それとATPをいっしょにいれて、インキュベートすればリン酸化するでしょう。

でも、なんのキナーゼでもリン酸化すればよいというものではないと思います。
キナーゼによって、リン酸化しないキナーゼももちろんありますし、
生体内とは違うところをリン酸化してしまうキナーゼもあると思います。

そこをどうするかはAIさんの実験次第かもしれませんが。

精製したタンパク質をリン酸化させる 削除/引用
No.2302-1 - 2010/03/26 (金) 15:13:58 - AI
精製したタンパク質をリン酸化させるキットはありますか?

具体的には、以下のようです。

Hisタグを付けたタンパク質Xを大腸菌に発現させてAKTAで精製しました。

タンパクXはある組織内ではリン酸化されており(タンパクX内の様々な箇所のセリン・スレオニンがリン酸化されています)、リン酸化されたタンパクXの活性を測定したいのです。

しかし精製したタンパクXはリン酸化されていません。

そこで、このタンパク質をキナーゼMixtureのようなものでいろいろな箇所のセリン・スレオニンにリン酸化させることはできないでしょうか?

何かご存知のことがあればよろしくお願いします。

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