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(無題) 削除/引用 No.2292-5 - 2010/03/26 (金) 09:03:30 - E.coli うーんと様、 ご意見有難うございます。 LPSについて少し質問させて下さい。 一応サンプルは、“Ni-NTA→ゲルろ過”にかけているのですが、それぐらいの精製度では足りないものなのでしょうか？精製度はどれくらい気にした方が良いものなのでしょうか？ 素人質問で申し訳ないのですが、よろしくお願いします。

(無題) 削除/引用 No.2292-4 - 2010/03/25 (木) 19:48:03 - うーんと 大腸菌なんですね。 いや、単に精製の程度でなにか目的のタンパク以外にコンタミがあってそれが影響している可能性もあるのかなあと。 単純にTATでも影響が出てしまうんですよね？なら例えばLPSなどのコンタミの影響を見ているだけなのかもと思った次第です。 私だったらTATだけでまず死なないdoseを決めて、それで目的のタンパクと融合させたものとの作用の違いを見ますね。もしそうしていたらすみません。聞き流してください。

(無題) 削除/引用 No.2292-3 - 2010/03/25 (木) 17:01:46 - E.coli うーんと様 早速のお返事有難うございます。 やはり20uMは多すぎなんですかね。 > ちなみに濃度はまだ測定しておりませんか？ もちろん測定しております。自分も5uM程度で用いていたのですが、自分の狙った効果が弱くてやけくそで濃度を上げてみたところ、細胞が死に絶えたということです。たった数倍でそんなに違うものなのですね。 > ちなみにそのタンパクは何で作りましたか？ 大腸菌です。その際、何か注意点とかあるのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.2292-2 - 2010/03/25 (木) 16:53:06 - うーんと TAT fusion proteinでも一般的に20 uMは多すぎる気がします。 1-5 uMでも十分だと思います。 ちなみに濃度はまだ測定しておりませんか？ ちなみにそのタンパクは何で作りましたか？

TAT融合タンパク質の細胞毒性 削除/引用 No.2292-1 - 2010/03/25 (木) 16:43:18 - E.coli あるタンパク質にHIV1-TATペプチド配列を融合させ、そのタンパク質を精製し、それをヒト細胞に導入する実験を試みております。 コントロールとしてTATのみのタンパク質も同様に取得し、使用しているのですが、この方法によるタンパク質導入は細胞毒性があまりない点が良いという記述をよく見かける割にTATのみでも結構死んでしまうなぁっていう印象を持ってます。 ちなみに自分は、Hela.S3細胞を用いて20uMのTATのみのペプチドを振りかけて、次の日には細胞が全滅していたのですが、もしご経験ある方がいらっしゃいましたら、何の細胞株で、どのくらいの濃度で良好な導入が見られたか教えていただけないでしょうか？ もちろん、様々な文献で大体用いられている濃度は把握した上での質問です。生のご意見が聞きたいので是非よろしくお願いいたします。

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