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RE:iPS細胞のＦＡＣＳ 削除/引用 No.229-3 - 2009/06/21 (日) 18:06:26 - 遅い もう問題を解決されたかもしれませんが、 �@「FSC-H」と「SSC-H」の画面で、通常の細胞株では、 　 一つの集団として表示されるのですが、iPS細胞では2つの集団 　 として表示されてしまいます。最初は「iPS細胞」の集団と、「SNL 76」 の集団と考え、「SNL 76」のみでFACSを行ったところ、その2つの集団の 　 領域ではありませんでした。 なぜ、2つの集団になってしまったのか原因不明です。 については、問題回避にしかなりませんが、無feeder系でiPSを培養して、ＦＡＣＳにかけて、iPS単独でのプロフィールを確認してはどうですか？ �A1次抗体を入れてない細胞も2次抗体(FITC標識)に反応してしまい、 　蛍光を発してしまうことです。 こちらは、ブロッキングをしっかりして、２次抗体を入れただけでは蛍光を発しない条件を抑えることがいいと思いますが。

Ｒｅ細胞の 削除/引用 No.229-2 - 2009/06/21 (日) 18:02:11 - 遅い �@「FSC-H」と「SSC-H」の画面で、通常の細胞株では、 　 一つの集団として表示されるのですが、iPS細胞では2つの集団 　 として表示されてしまいます。最初は「iPS細胞」の集団と、「SNL 76」 の集団と考え、「SNL 76」のみでFACSを行ったところ、その2つの集団の 　 領域ではありませんでした。 なぜ、2つの集団になってしまったのか原因不明です。 　 (iPS細胞が分化してしまったのでしょうか…？) �A1次抗体を入れてない細胞も2次抗体(FITC標識)に反応してしまい、 　蛍光を発してしまうことです。

iPS細胞のFACS 削除/引用 No.229-1 - 2009/03/24 (火) 19:00:31 - ペーペー 研究室でiPS細胞を樹立し、フローサイトメーターを用いて 細胞膜の表面抗原の発現レベルを確認しています。 まず、iPS細胞の培養状態ですが、フィーダーに「SNL 76」を用いて 実験を行っています。iPS細胞そのものには問題無いように思われます。 問題になっている点が2つ生じています。 �@「FSC-H」と「SSC-H」の画面で、通常の細胞株では、 　 一つの集団として表示されるのですが、iPS細胞では2つの集団 　 として表示されてしまいます。最初は「iPS細胞」の集団と、「SNL 76」 の集団と考え、「SNL 76」のみでFACSを行ったところ、その2つの集団の 　 領域ではありませんでした。 なぜ、2つの集団になってしまったのか原因不明です。 　 (iPS細胞が分化してしまったのでしょうか…？) �A1次抗体を入れてない細胞も2次抗体(FITC標識)に反応してしまい、 　蛍光を発してしまうことです。 1次抗体はSSEA-1(mouse IgM) 100倍希釈(PBS)　50分　on iceにて反応 　　　　↓ PBSにて2回wash 　　　　↓ 2次抗体はanti mouse IgM FITC 100倍希釈(PBS) 40分 on iceにて反応 　　　　↓ PBSにて2回wash 　　　　↓ FACS 当研究室は、iPSに関しては素人で専門家がいない為、聞く人もいません… おわかりの方、よろしくお願いいたします。

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