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KSR不要 削除/引用 No.2281-4 - 2010/05/04 (火) 08:54:14 - kkg オリジナルのSFEBq法ではKSRを使っていません。 http://www.pnas.org/content/105/33/11796.abstract この論文で解析されているように、gfCDMでなくてもインスリンを入れても問題ないようです。 ＫＳＲを使うかどうかというよりは、血清を使わないことが大切なのだと思います。 そもそも、ＫＳＲはＥＳの維持培養に使うものなので、神経分化効率がときどき悪くなります。

(無題) 削除/引用 No.2281-3 - 2010/03/23 (火) 01:54:38 - 神経君 >mnfさん 書き込みどうもありがとうございます。 私が使っているES細胞はfeeder-freeのマウスES細胞(CGR8)です。 リンクを貼って頂いた論文を少し読ませて頂きました。スフェロイドプレートを使うのとKSRを使うのが重要なのですね。EBを作る感じで培養すれば良いようなので私のような初学者にもできそうです。 私の解釈では上記の論文のprotocol通りESを分化させると、bf1を発現する神経前駆細胞で大部分を構成されているEB様の構造を作る。と考えているのですがこれで合っていますでしょうか？ また、なにぶん神経のことは専門外で良く分からないのですがNPCといっても色んなNPCがあるのですか？上記の論文ではtelencephalic progenitorsが出来てくると書いてあったので、他にもNPCの種類があるのかなと思いました。 分化させた神経前駆細胞は継代培養不可なのですね。ESとNPCの性質を比較する時に、最初にESから神経前駆細胞に分化させてしまい、後は神経前駆細胞を継代し続けて実験に使うのが便利だと思っていたのですがそれはできないのですね。

(無題) 削除/引用 No.2281-2 - 2010/03/22 (月) 18:21:16 - mnf ヒトESですか？マウスESですか？それとも他の種のES/iPSですか？ 血清中のBMP4等の余計なシグナルが入らなければ、 何もしなくてもES細胞は神経系に分化する傾向があります。 分化誘導法としてはKSRを含む無血清培地で浮遊培養を行う、 懸滴培養か96well スフェロイドプレートで胚様体を形成させる、 ある種のフィーダー細胞(M15,PA6等)上で培養する といった方法が一般的だと思います。 スフェロイドプレートを使用するSFEBq法のプロトコルは下記の論文に掲載されています。 http://www.cell.com/cell-stem-cell/abstract/S1934-5909%2808%2900455-4 分化誘導したES細胞はプライマリーに準ずるものなので、性質を維持したままディッシュ上で継代培養を続けて性質を維持するのは困難です。

ESの分化誘導（神経前駆細胞） 削除/引用 No.2281-1 - 2010/03/22 (月) 16:56:18 - 神経君 いつも参考にさせて頂いております。 最近の大規模Seqを使った論文ではES細胞と神経前駆細胞を比較しているものが多いと思うのですが、ES細胞から神経前駆細胞への分化誘導をどのようにして行っているのでしょうか？ 私も同じようにやってみようかと思い実験計画を考えているのですが、論文を読んでもイマイチ分化誘導法を想像することができません。なのでやり方の詳しいprotocolが載っている書籍等の情報があれば教えていただけないでしょうか？また、神経前駆細胞は継代培養をし続けることができるのでしょうか？ どうかよろしくお願いいたします。

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