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(無題) 削除/引用 No.2279-5 - 2010/03/29 (月) 02:49:00 - 小栗 初期のinvitrogenのレンチの作成法はtop10cellだったので一年位使ってましたが、大体３０−４０％位が最終段階でrecombinationしていました。いまはStbl3で３２Cでcultureしていますが、そういうことはまずなくなりました。

(無題) 削除/引用 No.2279-4 - 2010/03/24 (水) 11:55:31 - くりくりん 私もレトロではないですが、この問題でずいぶん悩みました。 最近はcompetent cellにStbl4を使い、miniprepで確認した後homemadeのDH5aにtransformし直してmaxiprepを行っています。 37℃でcultureすると組換えが起こって（だと思うのですが）正しいサイズのplasmidが取れなくなってしまうので、30℃でcultureしてます。私の場合は30℃ cultureで問題なくprepできますよ。 収量はStbl4よりもDH5aの方が良いような気がします。

(無題) 削除/引用 No.2279-3 - 2010/03/22 (月) 15:48:59 - dido stblや、今ではマイナーになりましたが、StratageneのSureシリーズを使わないとLTRを含む配列をうまく増やすのはなかなか難しいですね。確かにminiprepまでは行くのですが。DH5等で、３０度で劇的に改善したということはなかったです。

(無題) 削除/引用 No.2279-2 - 2010/03/22 (月) 09:57:37 - ~ 劇的によくなりました。 DH5aでも、30℃くらいに温度を下げるといいと聞いたことがありますが、 今後もインサートを色々入れていくでしょうから、 Stblシリーズを買っておいたほうがいいと思います。

LTRの入ったコンストラクトは 削除/引用 No.2279-1 - 2010/03/21 (日) 22:12:43 - ami 毎度お世話になっております。 LTRの入った、レトロウィルス用のプラスミドを作ったのですけど、大腸菌入れて、増やしても、miniprepくらいだと増えて、そこからmaxiprepみたいなのに持っていくとプラスミドがなくなったりします。使っている大腸菌はDH5αで、カタログとか見るとStbl3っていうのを使うといいらしいのですが、DH5αではやっぱり無理ですか。というか、Stbl3に変えてみようと思っているのですが、変えれば劇的によくなりますか。経験のある方などいらしたら教えてください。 よろしくお願いします。

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