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大腸菌発現抗体(scFv)のRefolding方法 トピック削除
No.2243-TOPIC - 2010/03/16 (火) 23:09:49 - Refolding
いつも参考にさせていただいております。

さて現在pET21bベクターおよびBL21DE3を用いてマウスの単鎖型抗体(scFv)を
発現させようと考えております。

抗体発現後のRefoldingの方法をどのようにしようか迷っているところです。

いろいろと方法がありますが、アルギニンを用いることによりある程度
簡便にRefoldingが行えるとの記述を見つけました。

そこで、どなたかご経験がある方で

1.アルギニンを用いたRefoldingの場合のアルギニンの濃度およびBuffer
2.反応時間および反応温度
3.その他必要な添加物等
などを教えていただくと幸いです。

蛋白のRefoldingに関して初心者ですので、皆様のお力をお借りしたいと考えております。
どうぞよろしくお願いいたします。
 
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Stepwise Dialysis System 削除/引用
No.2243-2 - 2010/03/17 (水) 10:01:33 - ats
以下の論文が参考になるかと思います。
Umetsu et al. How additives influence the refolding of immunoglobulin-folded proteins in a stepwise dialysis system. Spectroscopic evidence for highly efficient refolding of a single-chain Fv fragment. J Biol Chem (2003) vol. 278 (11) pp. 8979-87

大腸菌発現抗体(scFv)のRefolding方法 削除/引用
No.2243-1 - 2010/03/16 (火) 23:09:49 - Refolding
いつも参考にさせていただいております。

さて現在pET21bベクターおよびBL21DE3を用いてマウスの単鎖型抗体(scFv)を
発現させようと考えております。

抗体発現後のRefoldingの方法をどのようにしようか迷っているところです。

いろいろと方法がありますが、アルギニンを用いることによりある程度
簡便にRefoldingが行えるとの記述を見つけました。

そこで、どなたかご経験がある方で

1.アルギニンを用いたRefoldingの場合のアルギニンの濃度およびBuffer
2.反応時間および反応温度
3.その他必要な添加物等
などを教えていただくと幸いです。

蛋白のRefoldingに関して初心者ですので、皆様のお力をお借りしたいと考えております。
どうぞよろしくお願いいたします。

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