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BAC用の大腸菌株やRecA入りのplasmidの入手 トピック削除
No.2241-TOPIC - 2010/03/16 (火) 22:01:29 - BAC初心者
一応、BACについての過去のログで検索しましたが、
ないようですので、トピックを作らせていただきました。

BACを使ってみようと計画している初心者です。

目的は、細胞特異的promoter(10kbp以上はあるようで)にGFPなどを発現させ、細胞を区別することです。培養細胞で確認し、組織レベルに持っていく予定です。
予算が限られているので、なるべくキットよりは安価に計画しています。

理研などで購入したBACに、GFPを相同組換えで導入できると思いますが、
その時、必要なrecombinase A 活性をもつDY380(またはSW102)
または、recombinase A が組み込まれたplasmid(pSV1.RecAなど)の入手経験がある方、または知っている方、
入手方法や、かかる費用・入手にかかる時間などをお教えいただけますと
ありがたいです。
また、分与していただける方、そういった機関(できれば国内)の情報も、
とても助かります。
また、関連情報でもお待ちしています。
よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.2241-3 - 2010/03/18 (木) 01:53:05 - BAC初心者
atsさま

有用な情報ありがとうございます。

まずは、お礼まで。

改変 Red/ET Recombination 削除/引用
No.2241-2 - 2010/03/17 (水) 09:53:29 - ats
かずさDNA研究所 ヒトゲノム研究部の中山学さんが開発した改変 Red/ET Recombination plasmidが使用できると思います。
問い合わせは
http://www.kazusa.or.jp/j/laboratories/labo_humangene.html
にあるメールアドレスにお願いしてみてください。
参考文献 Manabu Nakayama & Osamu Ohara; Improvement of recombination efficiency by mutation of Red proteins, BioTechniques 38:917-924 (June 2005)

BAC用の大腸菌株やRecA入りのplasmidの入手 削除/引用
No.2241-1 - 2010/03/16 (火) 22:01:29 - BAC初心者
一応、BACについての過去のログで検索しましたが、
ないようですので、トピックを作らせていただきました。

BACを使ってみようと計画している初心者です。

目的は、細胞特異的promoter(10kbp以上はあるようで)にGFPなどを発現させ、細胞を区別することです。培養細胞で確認し、組織レベルに持っていく予定です。
予算が限られているので、なるべくキットよりは安価に計画しています。

理研などで購入したBACに、GFPを相同組換えで導入できると思いますが、
その時、必要なrecombinase A 活性をもつDY380(またはSW102)
または、recombinase A が組み込まれたplasmid(pSV1.RecAなど)の入手経験がある方、または知っている方、
入手方法や、かかる費用・入手にかかる時間などをお教えいただけますと
ありがたいです。
また、分与していただける方、そういった機関(できれば国内)の情報も、
とても助かります。
また、関連情報でもお待ちしています。
よろしくお願いします。

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