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(無題) 削除/引用 No.2223-5 - 2010/03/15 (月) 09:56:51 - よっしー 組織は固定してから凍結ですか，未固定ですか？ いずれにしても，未固定で切片を切って， アセトンなどで固定後，抗原賦活なしで試してみてはどうですか． 一般的にホルマリンやPFA等で固定したとき以外， 抗原賦活しなくでも大抵うまくいきますが・・・ データーシートの標本はよしださんと同じ固定法ですか？

(無題) 削除/引用 No.2223-4 - 2010/03/14 (日) 01:13:22 - よしだ 早速、レスポンスしていただきましてありがとうございました。 ところで、私は染色の初心者ではありませんので、これまでの染色は全てうまくいっています。ただ、この抗体だけがうまくいかないのです。 凍結切片を使用した蛍光染色です。 抗体のデータシートには、クエン酸バッファーを用いたantigen retrieval後、普通に免疫染色しているのですが、なぜか、うまくいかないのです。 同じ抗体を使っている論文の著者に問い合わせてみようかと、考えていたところでした。

(無題) 削除/引用 No.2223-3 - 2010/03/13 (土) 16:54:37 - み 膜蛋白だから上手くいっていないのではないでしょう。 抗体の特異性・反応性（パラフィン切片で染色可能なのか？抗原賦活化の方法）と固定法の選択など考慮しないといけない点が満載です。 その抗体に関して樹立された方法があるならそれを第一選択にされるべきでしょう。 御存知の通り、この辺は抗体によってマチマチですよね。 個人的には凍結切片で染まるか検討された方が良いかと。

(無題) 削除/引用 No.2223-2 - 2010/03/13 (土) 16:48:41 - よっしー もしよしださんが，これまでに組織や細胞で， いろいろな免疫染色を経験されているのでしたら， スルーしてください．そうでないなら参考になるのかな？？？ まず生細胞ですか？組織切片ですか？ 組織切片であれば，パラフィンですか？凍結ですか？ 固定はしていますか？していれば何でどのくらいしていますか？ どのような検出系ですか？蛍光ですか？発色ですか？ 発色なら酵素は何を使っていますか？ 抗原の賦活化は必要なのでしょうか？ そもそも，一次抗体以降の系はうまく働いていますか？ 免疫染色がうまくいかない原因はいろいろあります． 本当に抗原の賦活化のみに問題があるのですか？

膜上に存在する受容体の免疫染色 削除/引用 No.2223-1 - 2010/03/13 (土) 16:13:55 - よしだ 細胞膜上にある受容体を免疫染色したいのですが、なかなかうまくいきません。 トリスバッファー(pH9)を使って、電子レンジでantigen retrievalしていますが、最終的な像はいつもべたっと染まった中に陽性なんだかどうかはっきりしない染色もちらほら見られます。 一般論でいいのですが、細胞膜上にある受容体を免疫染色する場合にどの溶液でantigen retrievalするべきなのか（クエン酸バッファーがいいのか）、どのような点に注意したらいいのか、アドバイスをお願いします。 TSAで増幅させると、いたるところに陽性の染色らしきものがみえますが、いっぱいありすぎていまいち信用できません。それでも、1st Abなしではなにも染まりませんが。 稚拙な文章で今日sy区ですが、どかよろしくお願いいたします。

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