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8連泳動時の方法について トピック削除
No.2205-TOPIC - 2010/03/10 (水) 16:07:33 - ネモ
 いつもお世話になっています。ひとつ皆様にお聞きしたいことがあります。

 毎日大量のサンプルを電気泳動(PCR)しています。その際に8連に対応しているコームでゲルを作り、8連でapplyしています。PCRも8連チューブで行っているので、8連でサンプルを3μl取り、96 wellプレートにあらかじめ蒔いてある3μlのdyeと混ぜて、そのままapplyしています。
 ですが、このプレートが少し値がはります。

 そこで安い96 wellプレート、もしくは他の方法がお勧めという情報を持っている方がいましたら教えてください!!(できればプレートを使いたい。)

蓋なし96 wellプレート=200円前後の物を使っています。外国人の研究者の方に、もっと薄くてペラペラな96 wellがアメリカであったよというのですが、該当する商品が見つかりません。

よろしくお願いします。
 
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11件 ( 1 〜 11 )  前 | 次  1/ 1. /1


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No.2205-11 - 2010/03/11 (木) 22:27:35 - AP
単なる好奇心ですが、
>コンタミ等をすごく気にする方もおられるので、
実際、どういった事態が起こるのを心配しているのでしょうか?
できうる限り万全の準備をして望むというのは誰しも心を配るところでしょうけれど、合理的でない理由で不必要なコストをかけるというのも科学者らしくないことだと考えていますので。

(無題) 削除/引用
No.2205-10 - 2010/03/11 (木) 14:50:04 - ネモ
 皆様さまざまなアドバイスありがとうございました。

 コンタミ等をすごく気にする方もおられるので、96 wellプレートを使っていきたいと考えています。(水洗いは控えて)
 なのでkzさんが教えてくださったディスポプレートにしようかと考えています。
 3μl取った後のサンプルはシークエンスや、そのサンプル自身を長期保存するので、直接ロードできるようなバッファーにしたり、ローディングバッファーを直接入れたりはしていません。(カラムpurifyでないので)

 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.2205-9 - 2010/03/11 (木) 12:26:40 - AP
泳動サンプルを準備するくらいのことでしたら、わたしならざっと水洗して使い回します(私の感覚では、パラフィルムでももったいない)。いくら安いものを仕入れたところで、実験上、どうしても新品を使い捨てにしなければならないような理由がなければ(わずかなコンタミやキャリーオーバーでも問題が生じるような、たとえばSouthernで検出するとか)、浪費ではないでしょうか(単に金銭的な問題だけでなく、不必要に環境負荷をふやすことにもなります)。

(無題) 削除/引用
No.2205-8 - 2010/03/11 (木) 10:18:16 - Pumpkin
>そのままゲルにロードできるプレミックスPCR酵素

最近はTaKaRaとかも出してきて使いやすいですね。遺伝子増幅の確認だけなら非常に有用ですね。Go Taq (Promega)が出たばかりのころ、これでクローニングして塩基置換がバンバカ起きて困ったことがありました。皆様は、クローニングにこのような酵素を使わないでしょうけど(反省。

(無題) 削除/引用
No.2205-7 - 2010/03/10 (水) 23:25:14 - ザンギ
実験の目的にもよりますが、沢山でめんどくさいときは、そのままゲルにロード
できるプレミックスPCR酵素を使ってました。
プロメガ製だったかな。

(無題) 削除/引用
No.2205-6 - 2010/03/10 (水) 22:48:37 - TK-1
PCR tubeにそのままdyeを入れて混ぜてからloadingしています。3 ulを取った後のPCR productは何かに使うんですか?

(無題) 削除/引用
No.2205-5 - 2010/03/10 (水) 19:41:50 - kz
以前、PCR産物の制限酵素処理に、薄くてペラペラなコレを使っていました。オートクレーブ滅菌ができませんが、数百枚使っても問題ありませんでしたので、DNaseのコンタミはないようです。

ディスポプレート 100枚入
品番仕 様サイズ(*mm*)定価
2-4623-0196穴プレート86×128×7.0〜7.58400

(無題) 削除/引用
No.2205-4 - 2010/03/10 (水) 16:24:24 - 中年
その96 wellプレートを水ですすいで再利用してはどうですか。

(無題) 削除/引用
No.2205-3 - 2010/03/10 (水) 16:21:06 - ~
私もパラフィルムを使っていますが、くぼみを作るのが面倒なので、
そのまま使っています。

チェック用であれば、使用後に洗って乾かせば再利用できるのだと思いますが、
そこまではやったことがありません。

(無題) 削除/引用
No.2205-2 - 2010/03/10 (水) 16:17:30 - びんぼーにん。
けちくさい方法でよければ、ふたを開けた96wellのうえに、
同じサイズに切ったパラフィルムを裏紙を上にしてのせ、
強く押しつけ、裏紙をはがすと、うっすらくぼみができますよね?
3+3uL位の液量なら、これでも混ぜられると思うのですが、
いかがでしょう?

8連泳動時の方法について 削除/引用
No.2205-1 - 2010/03/10 (水) 16:07:33 - ネモ
 いつもお世話になっています。ひとつ皆様にお聞きしたいことがあります。

 毎日大量のサンプルを電気泳動(PCR)しています。その際に8連に対応しているコームでゲルを作り、8連でapplyしています。PCRも8連チューブで行っているので、8連でサンプルを3μl取り、96 wellプレートにあらかじめ蒔いてある3μlのdyeと混ぜて、そのままapplyしています。
 ですが、このプレートが少し値がはります。

 そこで安い96 wellプレート、もしくは他の方法がお勧めという情報を持っている方がいましたら教えてください!!(できればプレートを使いたい。)

蓋なし96 wellプレート=200円前後の物を使っています。外国人の研究者の方に、もっと薄くてペラペラな96 wellがアメリカであったよというのですが、該当する商品が見つかりません。

よろしくお願いします。

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