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Niカラムに結合させるのには、何個のHisが必要?
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No.2162-TOPIC - 2010/03/04 (木) 07:37:18 - imp
His-tag融合タンパク質をNiカラムに結合させるのに何個のヒスチジンが必要なのでしょうか?
以前何かの論文か何かで読んだ気がしたので検索してみたのですが、中々見つかりません。
ご存知の方いらっしゃいましたらよろしくお願いします。
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No.2162-4 - 2010/03/04 (木) 20:39:59 - パンタ
イミダゾールが競合剤として使われてるので、1個でもくっつくのでは?と思います。
(無題)
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No.2162-3 - 2010/03/04 (木) 10:01:04 - imp
>>cさん
投稿した後に思ったのですが、きっとHisが1個でも2個でもNi-columnには結合するけども、その後の洗いや、そもそもの結合力が弱くて離れて行くのかなと思いました。
ご返信ありがとうございました。
(無題)
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No.2162-2 - 2010/03/04 (木) 09:11:14 - c
6xHisが良く使われるので、少なくとも6個並んでれば付くのではないでしょうか。Hisが集中している領域がならば配列上並んでなくてもいいのかもしれないです。6個以下でもちゃんと付くかも知れないですが、結合の強さはどんなもんかなとおもいます。またそ6個以上だとこんどは強固について、はずすときにより強い条件が必要になるかもしれません。Hisのクラスターをもつような蛋白質などの非特異的な結合と親和性に差をつけて精製度を上げるため9xHisというもあったと思います。
Niカラムに結合させるのには、何個のHisが必要?
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No.2162-1 - 2010/03/04 (木) 07:37:18 - imp
His-tag融合タンパク質をNiカラムに結合させるのに何個のヒスチジンが必要なのでしょうか?
以前何かの論文か何かで読んだ気がしたので検索してみたのですが、中々見つかりません。
ご存知の方いらっしゃいましたらよろしくお願いします。
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