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メンブレンを複数枚いっぺんに扱うとバンドが汚くなる? トピック削除
No.2153-TOPIC - 2010/02/28 (日) 13:34:03 - 実験まあまあ好き
恐れ入ります。最近ウェスタンブロッティングの経験値を上げているところです。

ウェスタンの抗体反応時、メンブレン(PVDF)を複数枚同一のプラスチックシートにシールし、洗浄も複数枚いっぺんに同じタッパーで行うことがあります(TBS-T, Tween20 0.1%)。

この方法をとると、1枚づつ独立して扱う時よりバンドやバックグラウンドの「むら」が目立つような気がするのですが、例えばメンブレン同士が擦れることによる弊害ってあるのでしょうか? それとも、全く別の手技の問題だったりするのでしょうか?

お恥ずかしい質問ですが、よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.2153-5 - 2010/03/02 (火) 12:29:18 - 小児科医師(ゆとり教育)
私は複数枚のメンブレンを扱う時にはそれぞれの大きさにあったプラスチック容器を用意して洗浄しています。別々に洗ったほうがきれいに検出できます。

ありがとうございます 削除/引用
No.2153-4 - 2010/03/01 (月) 12:30:31 - 実験まあまあ好き
ご回答ありがとうございます。

メンブレンは重ねてパウチに入れてしまっています。洗浄もメンブレンの重なりができてしまう程度の大きさの容器です。

全く問題なくきれいなバンドが得られることもあるのですが、抗体次第(?)なのかもしれません。少々面倒でも、別々に処理したほうが無難なようですね。

(無題) 削除/引用
No.2153-3 - 2010/03/01 (月) 09:26:45 - TS
どんな感じでやるかによるのではないでしょうか?

私は、抗体反応の時には、1つのパウチに2枚くらいのPVDFを入れますが、それは短冊状になっていることが多いのと、重ねて入れるのではなく、並べて入れています。特に問題は感じません。

洗浄も、それなりの大きさのタッパーとかを使うし、洗浄中の振とう機がオービタルではなく、振幅タイプなので、メンブレン通しが擦れることもなく、これも大きな問題にはなっていません。

でも、たしかに擦れ合ったり、重ね合ったりするのは避けるような方法を取っていますね。洗浄とかのときも、メンブレンが重なってると、洗浄効率が悪き気がしたりしますし。

(無題) 削除/引用
No.2153-2 - 2010/02/28 (日) 13:54:27 - c
「メンブレン(PVDF)を複数枚同一のプラスチックシートにシール」はぜひ止めた方がいいです。膜がストリップ状とかで小さいならば、複数まとめて洗ってもいいですが、ゲルサイズくらいの大きさならばそういうやり方は止めた方がいいです。あと膜がよく動くように大きなタッパーでbuffer多めで洗うのがいいです。

メンブレンを複数枚いっぺんに扱うとバンドが汚くなる? 削除/引用
No.2153-1 - 2010/02/28 (日) 13:34:03 - 実験まあまあ好き
恐れ入ります。最近ウェスタンブロッティングの経験値を上げているところです。

ウェスタンの抗体反応時、メンブレン(PVDF)を複数枚同一のプラスチックシートにシールし、洗浄も複数枚いっぺんに同じタッパーで行うことがあります(TBS-T, Tween20 0.1%)。

この方法をとると、1枚づつ独立して扱う時よりバンドやバックグラウンドの「むら」が目立つような気がするのですが、例えばメンブレン同士が擦れることによる弊害ってあるのでしょうか? それとも、全く別の手技の問題だったりするのでしょうか?

お恥ずかしい質問ですが、よろしくお願いします。

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