全4件 ( 1 〜 4 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

ありがとうございます。 削除/引用 No.2129-4 - 2010/05/07 (金) 09:52:48 - haru あれ以来いろいろな方法を試してみました。lalalaさんのおっしゃる通り直接lysis bufferに溶かしてみたのが唯一上手くいきました。ただし量的には24ウェルのプレートで30μlから50μlとかなり少量のbufferで溶かさないとタンパク量は少ないようです。でも、これで少なくともWBは上手くいきましたので、この目的でタンパクを抽出するならばリカバリーソリューションやディスパーゼなどを使用する必要はないかと考えます。業者の人にも聞きましたが、どのような方法を試みても、おそらくマトリゲルから細胞の回収を行う際に細胞がどうしても減少するので、10の5乗レベルであれば難しいのかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.2129-3 - 2010/05/06 (木) 07:07:36 - lalala たしかにセルリカバリーソリューションはうまくいかないことが多いです。みる分子によると思いますがWBの場合直接RIPA bufferに溶かすのもありです。

マトリゲルからの細胞回収 削除/引用 No.2129-2 - 2010/05/04 (火) 15:09:49 - yuri こんにちは。 BDマトリゲル上に培養した初代培養細胞をセルリカバリーソリューションで回収しています。ゲルの希釈は2倍です。Cell　Lysateを得る目的で、24ウェルプレートに培養した細胞をリカバリーソリューションで回収しようとしていましたが、プロトコールとおりでは、やはり細胞が失われてしまい十分量のたんぱく質が得られませんでした。今は、35mmディッシュから回収しています。 　しかし35mmディッシュにリカバリーソリューション約5mlを使用していますが、今度は単層の細胞同士の離れが悪いようです。ディスパーゼなどの酵素を使うべきなのかもしれませんが、この場合はどちらを優先させればよいのでしょうか。 　回答になっていなくて申し訳ありません。どなたかご存じでしたら合わせてご教示ください。

マトリゲル上に培養した細胞のcell lysateの方法 削除/引用 No.2129-1 - 2010/02/23 (火) 12:16:36 - haru いつもお世話になります。現在取り扱っている細胞のcell lysateについて質問です。細胞は性質上マトリゲル上で培養しています。マトリゲルはBDのもので15倍に希釈したマトリゲルを24ウェルのプレート上に接着させ、そのうえで2×10の5乗程度の細胞を培養しています。cell lysate行う前に通常マトリゲルからまず細胞のみを回収することが必要だと思いますが、セルリカバリーソリューションを使用すると、元来細胞数が少ないこともあり、回収された細胞数がさらに減少してしまい十分なタンパク量を抽出できません。 マトリゲルから分解せずに直接M-PER(界面活性剤ベースの市販のキット)を用いたり、凍結融解したり注射針を使用したり、いろんな方法で細胞破砕を試みるのですが、なかなかタンパク抽出できません。（超音波破砕装置はありません。）マトリゲル上で培養した細胞をcell lysateされたご経験のある方いましたら何か方法がないものかご教示ください。

全4件 ( 1 〜 4 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

---