Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

トピック一覧 | 研究留学ネットに戻る

最新のフォーラム | このフォーラム | ひとつ前のフォーラム(readのみ)

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

U937DE4細胞培養について トピック削除
No.2095-TOPIC - 2010/02/15 (月) 21:15:09 - シャチ
U937DE4細胞を培養しております

いつも同じ条件で、凍結から起こして培養しておりましたが、
最近起こしてきても細胞のほとんどが死んでしまいます。
20℃ 800rpm 10分で遠心掛けて死細胞を除去してみますが、
また細胞がどんどん死んでしまいます。

どのようにしたら細胞を増殖させることができますか?

培養条件
@凍結から起こして、10%FBSαMEMに捲く
A20℃ 2000rpm 5分で遠心
B上清を吸引
C10%FBSαMEM10ml投入
Dcellカウント
EFalcon 25cm2(3014)に捲く
Fインキュベーターで培養
G次の日細胞を見て、死細胞があれば20℃ 800rpm 10分で遠心して上清を吸引
H10%FBSαMEMを入れて培養継続

以前は、この方法で十分培養できました。
なぜ細胞が死んでしまうのか、死なないようにするための改良点がありましたらよろしくお願いいたします
お力添え、アドバイスよろしくお願いいたします。
 
- このトピックにメッセージを投稿する -



2件 ( 1 〜 2 )  前 | 次  1/ 1. /1


(無題) 削除/引用
No.2095-2 - 2010/02/16 (火) 11:32:57 - ~
その細胞は使ったことがありませんが、
プロトコルが前と同じであれば、プロトコルに書かれている部分には問題が無いのだと思います。

1.凍結細胞の保存状態が悪くて、細胞が既に死んでいる
 これだとどうしようもありません。
 保存条件が適切である記録はありますか?
 他の場所に保存していたストックはありますか?

2.ウシ血清のロットが悪い
 ウシ血清のロットが最近変わりませんでしたか?

3.インキュベーターが壊れていて、CO2濃度がおかしい
 同じインキュベーターに入れているほかの細胞は大丈夫ですか?
 フェノールレッドの色はおかしくありませんか?

4.MEMの調整を間違えている
 調整時のノートを確認しましたか?
 他の細胞を撒いてみれば分かるかもしれません。

などを疑ってみてはいかがでしょうか。

個人的には10分の遠心はかけすぎだと思いますが、
その遠心の前に死細胞が多いのですから、そこは問題ではないのでしょう。

U937DE4細胞培養について 削除/引用
No.2095-1 - 2010/02/15 (月) 21:15:09 - シャチ
U937DE4細胞を培養しております

いつも同じ条件で、凍結から起こして培養しておりましたが、
最近起こしてきても細胞のほとんどが死んでしまいます。
20℃ 800rpm 10分で遠心掛けて死細胞を除去してみますが、
また細胞がどんどん死んでしまいます。

どのようにしたら細胞を増殖させることができますか?

培養条件
@凍結から起こして、10%FBSαMEMに捲く
A20℃ 2000rpm 5分で遠心
B上清を吸引
C10%FBSαMEM10ml投入
Dcellカウント
EFalcon 25cm2(3014)に捲く
Fインキュベーターで培養
G次の日細胞を見て、死細胞があれば20℃ 800rpm 10分で遠心して上清を吸引
H10%FBSαMEMを入れて培養継続

以前は、この方法で十分培養できました。
なぜ細胞が死んでしまうのか、死なないようにするための改良点がありましたらよろしくお願いいたします
お力添え、アドバイスよろしくお願いいたします。

2件 ( 1 〜 2 )  前 | 次  1/ 1. /1


パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を