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(無題) 削除/引用 No.2079-5 - 2010/02/13 (土) 14:53:37 - とと ぶんさん 大変わかりやすく教えていただきありがとうございました！！

(無題) 削除/引用 No.2079-4 - 2010/02/13 (土) 14:40:28 - ぶん ベクターの原液を同じ組成の液で20倍希釈したものをストックしてます。 PCR後精製したDNA fragment 4 ul + TOPO kit付属のsalt 1 ul + 希釈したTOPO vector 1 ul （この半量でやってる人もいるみたいですが） で半量（全量でもOK）を50ulのコンピにT.Fしています。 他のラボで教えて貰ったのですが問題ありません。

(無題) 削除/引用 No.2079-3 - 2010/02/13 (土) 12:22:17 - とと >>ぶんさん >ベクターは20倍に薄めて使ってますが、全く問題ありません。 通りすがりの者です。 私の所属するlabでもTOPO cloning kitを使用していますが、20倍での使用でも出来るのかと驚いています。 詳しく教えていただけませんでしょうか？ ちなみに私のprotocolでは PCR後精製したDNA fragment 2 ul + TOPO kit付属のsalt 0.5 ul + TOPO vector 0.5 ul --------------------------- total 3 ul のscaleでしばしincubateした後、うち2 ulをDH5α（これも４分の1量の大腸菌）にtransformしています。 ぶんさんの20倍というのはどの段階で希釈していますか？ 原液vector 1 --> TA 19 ulに希釈したものをstockしているのでしょうか？ 詳しく教えていただけますと幸いです。

(無題) 削除/引用 No.2079-2 - 2010/02/13 (土) 12:02:15 - ぶん うちではTOPOクローニングキットを使ってますが ベクターは20倍に薄めて使ってますが、全く問題ありません。 それでも大量にコロニーが出るのでもっと薄めても大丈夫なのかも知れません。

安いTAクローニングキット 削除/引用 No.2079-1 - 2010/02/13 (土) 11:43:30 - ami お世話になっております。 安いTAクローニングキット探してます。Tベクターを自作する方法もあるのも知ってますが、ちょっとそこまでできないので、売ってるキットで安いのないかなぁと思ってます。現在は、ラボでは、Invitrogenのを使ってます。けちって使えればそれでもいいかもなので、そういうのもできるなら教えてください。 よろしくお願いします。

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