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(無題) 削除/引用 No.2071-4 - 2010/02/12 (金) 13:18:23 - う 付着細胞で30分だったらまだ浮いている細胞もの多い？？？ もしや、トリプシンとかではがしてまき直して実験するつもり？ インヒビターとか言う前に、ちょっと考え直した方がいいのでは？ 質問者の身の回りに相談する人が居るのであれば、ちゃんと教えを乞うべき。 もし、ここでの質問で済ませようと言うのであれば、 もう少し前段階の調整の仕方も書いてみたらどうですか？ なんかインヒビターとか言う以前の問題があるのではないかと。

(無題) 削除/引用 No.2071-3 - 2010/02/12 (金) 12:35:42 - いざ ありがとうございます。 細胞は一応接着細胞です。 30分だったら、まだ浮いてるのも多いかな、と思いまして。 ４．最初の30分培養後、同じ濃度のブロッキング試薬＋刺激 　　を入れて培養を続ける ということでよろしいでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.2071-2 - 2010/02/12 (金) 12:18:21 - うわっ ということは浮遊細胞をお使いという理解でよろしいでしょうか。 １．最初の30分培養後、遠沈して試薬入りのメディウムを吸引し、 　　ブロッキング試薬の入ってない形で培養を続ける、のか、 ２．最初の30分培養後、遠沈して試薬入りのメディウムを吸引し、 　　同じ濃度のブロッキング試薬を入れた形で培養を続ける、のか、 ３．最初の30分培養後、そのまま刺激を入れて培養を続ける 　　（ブロッキング試薬は最初の濃度の4/5〜2/3くらいで入ったまま） ３の方法は難しいですよね。 それよりは２番の方法が無難じゃないでしょうか。 １番でもいいけど３番は普通はやらないと思います。

シグナルブロックの試薬の使い方 削除/引用 No.2071-1 - 2010/02/12 (金) 12:04:25 - いざ 細胞を刺激して培養する際に、 シグナルブロックしてその反応をみようとしています。 U0126とかMG132あたりを使用したいと思っていますが、 各論文やプロトコル等を見てると、 １．最初に規定濃度で30分pre-incubate ２．その後に通常通り刺激を入れて培養を行う というmethodがあります。 この時、ブロッキングの試薬は １．最初の30分培養後、遠沈して試薬入りのメディウムを吸引し、 　　ブロッキング試薬の入ってない形で培養を続ける、のか、 ２．最初の30分培養後、遠沈して試薬入りのメディウムを吸引し、 　　同じ濃度のブロッキング試薬を入れた形で培養を続ける、のか、 ３．最初の30分培養後、そのまま刺激を入れて培養を続ける 　　（ブロッキング試薬は最初の濃度の4/5〜2/3くらいで入ったまま） この３つのうち、どれでしょうか？

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