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Predict配列のプライマー設計 トピック削除
No.2047-TOPIC - 2010/02/08 (月) 11:13:08 - 素朴な質問2
こんにちは。お世話になっています。現在犬のある遺伝子発現をリアルタイムRT-PCRで定量したいと考えています。ところが、その遺伝子の配列がPrecidtとして、5種類のっています。1つだと、それを用いるしかないとなるのですが、5種類だと、どの配列からプライマーを合成するのか迷ってしまいます。そこで各配列の共通部分を選択してプライマーを作製したのですが、Primer Blastではよいプライマーが作れませんでした。
こういった場合、みなさんはどのように対処されているでしょうか。
また、いくつもPredict配列が掲載されているときは、掲載されている順は何か意味を持つのでしょうか。ご存知の方がいれば教えてください。
 
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(無題) 削除/引用
No.2047-3 - 2010/02/08 (月) 16:29:39 - みみ
目的遺伝子のヒトとかマウスのパラログは同定されていませんか?
それらとアライメントを取って「一番ありそうな」配列を決めることはできると思います。
また,そのパラログやホモログ遺伝子の機能がある程度分かっているのなら,機能に必須なドメインを欠いた「Predict」配列は意味がないと判断できます(実験目的によりますが)。

(無題) 削除/引用
No.2047-2 - 2010/02/08 (月) 12:47:31 - ザンギ
全部の組み合わせを試します。

さらに言うなら実験的に転写産物の配列が定まってないものを、どれだけ
測定しても意味がないので、測定している転写産物にORFが収まることを
確認してから発現解析します。

Predict配列のプライマー設計 削除/引用
No.2047-1 - 2010/02/08 (月) 11:13:08 - 素朴な質問2
こんにちは。お世話になっています。現在犬のある遺伝子発現をリアルタイムRT-PCRで定量したいと考えています。ところが、その遺伝子の配列がPrecidtとして、5種類のっています。1つだと、それを用いるしかないとなるのですが、5種類だと、どの配列からプライマーを合成するのか迷ってしまいます。そこで各配列の共通部分を選択してプライマーを作製したのですが、Primer Blastではよいプライマーが作れませんでした。
こういった場合、みなさんはどのように対処されているでしょうか。
また、いくつもPredict配列が掲載されているときは、掲載されている順は何か意味を持つのでしょうか。ご存知の方がいれば教えてください。

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