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(無題) 削除/引用 No.2038-3 - 2010/02/08 (月) 16:22:44 - チームＡ 抗体さん、どうもありがとうございました。 まさにご指摘の通りで、プライマーが完璧に特異的でないところから来る問題です。 既知のプライマーセットを使われた方がいることを期待して投稿したのですが、トピックがマイナー過ぎたかもしれません。 タイピングキットで最初に絞り込むというのは良いアイデアですね。さっそく検討してみます。

Re:モノクロ抗体のパラトープ配列決定について 削除/引用 No.2038-2 - 2010/02/06 (土) 14:36:09 - 抗体 質問の意味が少し不明なのですが、 ＜重鎖のサブタイプIgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3のそれぞれについてPCRをかけたところ、一つのクローンからどのPCRでもバンドが増幅されてきます。 というのは、それぞれのプライマーでPCRをしたところ、1つのクローンから℃のプライマーででも増幅されたということでしょうか？ モノクロ抗体はサブタイプは1つのはずですので、どれも出るということはプライマー設定を考え直さないといけないということでしょう。 抗体の問題というよりはPCRのプライマーの問題ではありませんか？ サブタイプを決めたいのでしたら、まずタイピングキットでしらべてみられてはいかがですか？

モノクロ抗体のパラトープ配列決定について 削除/引用 No.2038-1 - 2010/02/04 (木) 13:29:11 - チームA モノクローナル抗体の可変領域の配列決定を行っているのですが、5'RACEから免疫グロブリンの特定の鎖をPCRで増幅させようとするとき、PCRの特異性が高くないようなのです。 重鎖のサブタイプIgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3のそれぞれについてPCRをかけたところ、一つのクローンからどのPCRでもバンドが増幅されてきます。 TAクローニングして配列を見ると違うものもかなり入っているようですし、PCRの特異性がもう少し改善できれば後の労力が軽減されるのにと考えています。 この種の実験に経験がおありの方がいらしたら、アドバイスをいただけますと助かります。

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