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(無題) 削除/引用 No.2033-7 - 2010/02/05 (金) 11:28:58 - リン酸化 ＞MA様 ＞う様 大変参考になるご意見を頂きありがとうございました。 まずは別の方法で検討してみようと思います。

(無題) 削除/引用 No.2033-6 - 2010/02/05 (金) 10:51:47 - う 私のIPしたサンプルで、です。 これでうまくクリアなバンドとして検出できれば、 刺激前後でリン酸化の違いをちょっとでも見れるかもと ほくそ笑んでいたが、IPでよくわからない結果を得、 まぁ一応やってみた前後の比較も、迷宮入り。

(無題) 削除/引用 No.2033-5 - 2010/02/04 (木) 16:51:45 - MA ども。 ちゃんと書いてなくて済みません。 phos-tag acrylamideです。 ゲルに混ぜて、と言う意味になります。 リン酸化部位ごとにバンドを確認できました（WB)。 IPしたサンプルでもリン酸化体のバンドを得られました。 （CBBで染めてMS/MSでリン酸化サイトを特定しました） 抗体の件ですが、もちろんIPしたもので行っております。 そうでないと、何を見ているか分からなくなってしまいますので。 半額くらいの有償サンプルしか出してくれませんでした。 リン酸化セリンといっても、抗体のエピトープは数残基認識しますからね。 まぁ、ダメもとでって感じですね。

(無題) 削除/引用 No.2033-4 - 2010/02/04 (木) 08:56:57 - リン酸化 使用感をお教えいただきありがとうございました。 お二人とも、目的のタンパクをIPしたあとに抗体でブロットした ということで良いでしょうか。だとしたら、なかなか使いにくいですね。 ＞MA様 ちなみにPhos-tagを使われているとのことですが、 ビオチン化されたPhos-tagでブロットしておられるのか、 またはゲルに混ぜて泳動度の変化を見られているのか 教えていただけないでしょうか。 よろしくお願いします。

(無題) 削除/引用 No.2033-3 - 2010/02/03 (水) 15:55:40 - う 私も、その抗体使ってみましたが、何が何やら全くわかりませんでした。

(無題) 削除/引用 No.2033-2 - 2010/02/03 (水) 15:16:02 - MA 抗体ですので、合う合わないがあると思います。 私は全然ダメでした。 ProQやPhos-tagの系は綺麗に出るのですが。 セリン残基のポイント変異で、ProQおよびPhos-tagで確認しました。

抗リン酸化セリン抗体 削除/引用 No.2033-1 - 2010/02/03 (水) 15:08:28 - リン酸化 いつもお世話になっております。 現在、あるキナーゼの基質を探す仕事をしております。 MSを用いた解析からいくつかのタンパク質が候補として得られており、 実際このキナーゼにより、細胞内でリン酸化を受けているかどうか検討しています。 この目的のため、この基質を精製した後に ProQ diamondやPhos-tagを用いてリン酸化を検出しようと計画していましたが、 最近ミリポアが新しいタイプの抗リン酸化セリンの抗体 (4A4)を販売しているようです。 この抗体を使った方がおられましたら、従来のリン酸化セリン抗体との違いなどを 教えていただけないでしょうか。よろしくお願いします。

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