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(無題) 削除/引用 No.2016-8 - 2010/02/05 (金) 12:27:12 - IF 再度探してみます。 ありがとうごいました。

(無題) 削除/引用 No.2016-7 - 2010/02/04 (木) 09:31:23 - CJ 私はＣＤ４５を染めたことはないですが、マウス抗体以外の選択肢はないんでしょうか？ちょっと検索してみると山のように抗体が出てきます。参考論文で使っている抗体をリストアップしてみてはいかがでしょう？

(無題) 削除/引用 No.2016-6 - 2010/02/04 (木) 06:11:04 - IF 癌細胞を人血液から取ってきて、それをサイトケラチン（癌のマーカー）とＣＤ４５（白血球）でダブル染色を考えています。サイトケラチンに関しては、染まりが悪く、色々なクローンを試行錯誤して、色々なサイトケラチンを認識するモノクローナル抗体（マウス）のミックスチャーを使っています。2次抗体でＡｌｅｘａ４８８を使っています。ＣＤ４５に関しては、ラビットのポリクローナルを2種類試しましたが（2次抗体でＡｌｅｘａ594）、バックグラウンドが高くて、使えません。ラビットのモノクローナルを使いましたが（2次抗体でＡｌｅｘａ594）が、ポジコンでも、染まりが悪いセルが混在していました。そこで、マウス由来の直接標識された良いＣＤ４５抗体があればと考え、相談しました。

(無題) 削除/引用 No.2016-5 - 2010/02/03 (水) 08:18:51 - CJ どうしても直接法でやりたいのでしたら、invitrogenからalexa色素のラベリングキットがありますから、それを使うと良いでしょう。 また、１次抗体と２次抗体をあらかじめ混ぜておく方法もあります。

(無題) 削除/引用 No.2016-4 - 2010/02/03 (水) 08:16:48 - CJ なぜ直接法を考えておられるのでしょう？感度が悪いですよ。

(無題) 削除/引用 No.2016-3 - 2010/02/03 (水) 03:44:10 - IF お返事ありがとうございます。 594を使っているのは、568とＦＩＴＣとのかぶりを気にしています。 直接蛍光標識された抗ヒトＣＤ４５抗体を探しても、Alexa 568/594で標識されたものが、見つかりません。各カンパニーやbiocompareで探しました。 Ａｌｅｘａ以外の色素で赤、オレンジでExcitation/Emission 560/580-595/610の範囲内の明るい色素はご存知ですか？

(無題) 削除/引用 No.2016-2 - 2010/02/02 (火) 08:36:05 - CJ Alexaで良いんじゃないでしょうか。私でしたらAlexa568を使ってしまいますが（おそらくＦＩＴＣとの蛍光のかぶりを気にして５９４をつかっているのでしょうね）。 ５９４はTexas Redの代替品ですので、それ用のフィルタセットを使えばもっと明るく観察できます。

赤で最も良い蛍光色素は？ 削除/引用 No.2016-1 - 2010/02/02 (火) 07:21:05 - IF 現在、細胞の蛍光免疫（メタノール固定または４％ＰＦＡ固定） をしています。 緑はＦＩＴＣ、Alexa 488,赤はAlexa 594を使用しています。 蛍光顕微鏡のフィルターは、ＦＩＴＣ用とローダミン用のフィルターを用いています。Alexa 594は、ローダミン用のフィルターと少し不一致ですが、会社の人とも相談し、Alexa 568でなく、Alexa 594を使用しています。 私のフィルターから推測すると、Excitation/Emission 560/580-595/610の範囲は観察できる思います。 今回、赤の色素で直接蛍光標識された抗ヒトＣＤ４５抗体を探しています。 ネットで検索すると色々な色素が出てきます。どの赤の色素が最も明るく、光安定性があるのでしょうか？ ＰＥは、すぐに明るさが弱くなる等は知っているのですが、本を読んでも、この色素が良いと書いているものが見当たらす、質問させて頂きました。 自分の調べた範囲内では、Alexa 594が明るく安定性があると考え、使用しました。 また、もし、これが良いという赤の色素で標識された抗ヒトＣＤ４５がありましたら、教えて頂けないでしょうか？

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