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(無題) 削除/引用 No.2015-6 - 2010/02/05 (金) 12:22:47 - IF あかね様 ありがとうございます。 では一度、このキットを試してみようと思います。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.2015-5 - 2010/02/04 (木) 17:56:22 - あかね 私がzenonを使用したときは、すべての抗体反応を終えた後に4%PFAで10min固定してから検鏡しました。なので、検鏡している間に抗体がどんどん剥がれて行くようなことは、あまり考えていません。なので、観察時にbackgroundがあがるという印象はありません。それよりも、抗体に反応している蛍光色素の量が、一般的な二次抗体を使った場合よりも、少ないので感度が低いという印象です。 もちろん、タンパク質の量、抗体の感度さえ良ければ、少々蛍光感度が落ちようとも観察できるのは間違いありません。

(無題) 削除/引用 No.2015-4 - 2010/02/04 (木) 06:18:30 - IF あかね様 ご返事ありがとうございます。 Zenonでは、時間がたつと標識されたＦａｂ抗体がターゲットの一次抗体から離れて、暗くなっていくとありました。実際は、観察しているうちに、かなり退色が早いですか？また離れたＦａｂがバックグラウンドにならないか危惧しています。どうだったのでしょうか？ プロトコールではパラホルムアルデヒドで後固定して、その解離を防ぐとありますが、それでも、退色が早ければ、他の固定法とかを試したことはありますか？ お忙しいところ申し訳ありませんが、御教授の程宜しくお願い申し上げます。

(無題) 削除/引用 No.2015-3 - 2010/02/03 (水) 03:56:56 - IF ､ｽ､ｦ､ﾇ､ｹ､ﾍ｡｣｣ﾆ｣皀筅ﾀ､ｱ､ｬ･鬣ﾙ･�､ｵ､�､ﾆ､､､�､ﾎ､ﾇ｡｢ﾍｨｳ｣､ﾎ｣ﾆ｣ﾃ､篌ｬ､�､ﾀ2ｴﾎｿｹﾌ螟隍熙ﾏｰｵ､､､ﾇ､ｹ､隍ﾍ｡｣ ｣ﾚ｣螢�｣�｣�ﾊｹﾓﾃ瓶､ﾏ｡｢･ﾗ･�･ﾈ･ｳｩ`･�ﾍｨ､遙｢･ﾑ･鬣ﾛ･�･爭｢･�･ﾇ･ﾒ･ﾉ､ﾇｹﾌｶｨ､ｷ､ｿ､ﾎ､ﾇ､ｹ､ｫ｣ｿ瓶馮ｽUﾟ^､ﾈ､ﾈ､筅ﾋ｡｢ｻ睨遉ﾎ･ﾇｩ`･ｿｩ`､ﾋ､｢､�､隍ｦ､ﾋｹｲﾓﾐｽYｺﾏ､ﾇ､ﾊ､､｣ﾆ｣皀筅ﾏﾄｿｵﾄｿｹﾌ螟ｫ､鴉x､�･ｷ･ｰ･ﾊ･�､ﾏ､ｫ､ﾊ､�ﾂ荀ﾁ､ﾆ､､､ｯ､ﾎ､ﾇ､ｷ､遉ｦ､ｫ｣ｿ ･鬣ﾙ･�･�･ｰ･ｭ･ﾃ･ﾈ､ﾇ､ｹ､ｬ｡｢APEX Antibody Labeling Kit､ﾎ､ｳ､ﾈ､ﾇ､ｹ､ｫ｣ｿ10ｨC20 ｦﾌg､ﾎｿｹﾌ螟ﾎ･鬣ﾙ･�､ﾎ･ｭ･ﾃ･ﾈ､ﾇ｣ﾂ｣ﾓ｣ﾁ､ｬ､｢､ﾃ､ﾆ､簗ｹﾓﾃ､ﾇ､ｭ｡｢2.5瓶馮ｳﾌ､ﾇ､ﾇ､ｭ､�､ﾈ抱､､､ﾆ､｢､熙ﾞ､ｷ､ｿ｡｣ ､ｿ､ﾀ｡｢ｻ睨遉ﾎｽBｽ鬢ﾇ､ﾏ｡｢ﾃ�､�､ｵ､ﾏ｣ﾚ｣螢�｣�｣�､ﾈﾍｬ､ｸ､ｯ､鬢､､ﾈ､｢､熙ﾞ､ｷ､ｿ､ｬ｡｢､ｳ､�､�ﾊｹﾓﾃ､ｵ､�､ｿｽU�Y､ﾏ､ｪ､｢､熙ﾇ､ｷ､遉ｦ､ｫ｣ｿ ､筅ｷ｡｢ｽU�Y､ｬ､｢､�､ﾐ｡｢｣ﾚ｣螢�｣�｣�､ﾈｱﾈ､ﾙ､ﾆ｡｢､ﾉ､ﾁ､鬢ｬﾁｼ､ｫ､ﾃ､ｿ､ｫﾂ└ｫ､ｻ､ﾆ�筈ｱ､ﾊ､､､ﾇ､ｷ､遉ｦ､ｫ｣ｿ

(無題) 削除/引用 No.2015-2 - 2010/02/02 (火) 19:10:15 - あかね Zenonの使用感ですが、通常の２次交代を用いた免疫染色よりも感度は低いです。 Protein G等で一度抗体を粗精製してから、NHS ester等でラベルした方が良いかもしれません。 invitrogenから少量の抗体でもラベルできるキットが出ていると思います。

抗体のラベル法で最も良い方法は？ 削除/引用 No.2015-1 - 2010/02/02 (火) 07:04:31 - IF 細胞の蛍光免疫多重染色を考えております。 その際に、市販のマウスモノクローナル抗体を蛍光標識しようと考えています。抗体の濃度は、低いものは25ug/ml、高いものは900ug/mlです。ただ、量は多くなく、500ulです。BSA等も抗体に含まれています。 このような条件で、抗体をラベルするのは、どの会社のどのキットが宜しいでしょうか？ 色々と調べて、invitrogenのZenon標識試薬が少量の抗体でＢＳＡが含まれているものに良いと感じました。これはＩｇＧに対するＦａｂ抗体を標識し、それを目的の一次抗体に混ぜて、10分でできるというものでした。 ただ、データーをきっちり読んでいくと問題もあり、会社に問い合わせしたところ、やってみないとどうなるかは具体的には分からないみたいでした。 （いくつか問題で特に問題が、この反応が抗体反応によるもので、時間とともにＦａｂが目的抗体から離れていくことです、反応後、パラホルムアルデヒド固定で、解離をある程度抑えられるとのことでしたが、、、）。 上記質問と、具体的にこのキットを使った方がいましたら、その結果や、問題克服の方法を教えて貰えないでしょうか？

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