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(無題) 削除/引用 No.2007-6 - 2010/02/01 (月) 00:45:40 - aji リガンドがタンパク質ではない可能性はないのでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.2007-5 - 2010/01/31 (日) 23:25:22 - ami > FACS（cell sorting)が使えるなら、cDNA発現ライブラリーを用いたクローニングという手もありそうです。 >ソーターはこちらには無い状況ですので、 ソーターなくてもcDNA発現ライブラリーのスクリーニングとかできます。ディッシュを抗体でコートして、そこにひっついた細胞をSelectしていく手です(パニングとか言われます)。

(無題) 削除/引用 No.2007-4 - 2010/01/31 (日) 23:06:18 - るる ats様 アドバイスありがとうございます。 ソーターはこちらには無い状況ですので、 架橋薬を試してみようと思います。

(無題) 削除/引用 No.2007-3 - 2010/01/31 (日) 11:13:20 - ats FACS（cell sorting)が使えるなら、cDNA発現ライブラリーを用いたクローニングという手もありそうです。

(無題) 削除/引用 No.2007-2 - 2010/01/31 (日) 11:10:36 - ats リガンドとの結合が弱く、免疫沈降の洗浄中に外れてしまうのではないでしょうか。 そうだとすると、DSP、sulfo-SBEDなどの二価性架橋試薬を使ってみてはいかがでしょうか。

リガンドの同定について 削除/引用 No.2007-1 - 2010/01/30 (土) 22:24:57 - るる お世話になっております。 ある分子に対するリガンド探索をしている者です。 アドバイスをいただけたらと思い投稿しました。 分子Aに対するリガンドを同定する目的で、AとヒトIgG1Fc の融合たんぱくを作製し、リガンドが出ている細胞、細胞株 をまずスクリーニングしました。その結果、FACSにより ある細胞株の細胞表面にリガンドが出ていることを示唆す る結果を得ました。 その細胞株を可溶化し、上記融合たんぱくによって免疫沈降 しているのですが、可溶化薬の条件、インキュベーション時間、 融合たんぱくの濃度検討をしても何も検出されません。銀染色で 何か見える程度にしたいと思い、細胞数を１０の９乗オーダー まで増やしても見えるのは融合たんぱくのバンドのみでした。 何か他に改変するべき条件はあるでしょうか。

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