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serum starvationの方法 トピック削除
No.1997-TOPIC - 2010/01/29 (金) 11:13:50 - ひでお
いつも大変参考にさせて頂いております。
初歩的な内容で申し訳ないのですが、
一つ相談させて下さい。

いくつかの細胞株(Helaなど)を用いて
Insulin等の試薬を加えたことによる
pAktの発現の変化を解析しようと試みています。
その場合、insulinを加える前にserum starvationが必要と
考えているのですが、そのstarvationの方法を
教えて頂きたいのです。

普段はDMEM+10%FBSで培養していますが
そこから単にFBSを無くすだけで良いのか、
あるいはFBSを無くす代わりに他の試薬を加えるべきなのか…
(そうしないとstarve中に細胞がプレートから剥がれしまう
ことがあると聞きました。)

あまりに基本的な内容すぎて恐縮ですが
どなたかご教示の程、宜しくお願い申し上げます。
 
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(無題) 削除/引用
No.1997-3 - 2010/01/30 (土) 14:34:51 - HeLa
培地から蛋白(というよりアルブミンかな)が無くなると細胞はだいたい具合悪くなるので、FBSをゼロにする場合でも、BSAを0.2%程度は加えるのが普通かなと思います。ただ、FBSを0.1%にしても事実上同じ効果なので、それでいい場合は簡単なのでよく使っています。問題はむしろstarvationの時間のように感じます。細胞でrestingになるまで必要な時間が異なるので、これはやってみるしかないというのが、私の印象です。

(無題) 削除/引用
No.1997-2 - 2010/01/29 (金) 11:17:22 - う
私は、FBSを抜くだけ、もしくは0.1%とか低い濃度にして
検討した時間(自分で、もしくは論文で)培養してやる。

もちろん、長時間すればはがれやすかったり、細胞が死んだり
それも含めて要検討。

serum starvationの方法 削除/引用
No.1997-1 - 2010/01/29 (金) 11:13:50 - ひでお
いつも大変参考にさせて頂いております。
初歩的な内容で申し訳ないのですが、
一つ相談させて下さい。

いくつかの細胞株(Helaなど)を用いて
Insulin等の試薬を加えたことによる
pAktの発現の変化を解析しようと試みています。
その場合、insulinを加える前にserum starvationが必要と
考えているのですが、そのstarvationの方法を
教えて頂きたいのです。

普段はDMEM+10%FBSで培養していますが
そこから単にFBSを無くすだけで良いのか、
あるいはFBSを無くす代わりに他の試薬を加えるべきなのか…
(そうしないとstarve中に細胞がプレートから剥がれしまう
ことがあると聞きました。)

あまりに基本的な内容すぎて恐縮ですが
どなたかご教示の程、宜しくお願い申し上げます。

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