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(無題) 削除/引用 No.1950-3 - 2010/01/23 (土) 11:01:52 - アキラ APさん なるほど理解できました。 お忙しい中、どうもありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.1950-2 - 2010/01/21 (木) 13:51:32 - AP フェノール抽出でタンパク質が有機溶媒相に分離するのは、高塩濃度で促進されます。高塩濃度下でいったん有機溶媒相に入ったタンパク質が、逆抽出の時に塩濃度を下げてしまったため、中間層に出てくるのではないでしょうか。逆抽出に加えるバッファーも、最初の抽出時と塩濃度をそろえてみてはどうでしょうか。

フェノクロ抽出下層に対する逆抽出での中間層 削除/引用 No.1950-1 - 2010/01/21 (木) 10:41:36 - アキラ ChIP assayを行っていますが IP → 脱クロスリンク（高塩濃度で65℃ 5h） → RNase処理（37℃ 1h） 　→ Pro. K処理（55℃ Overnight）→ フェノクロ／イソプロ沈 と進めています。 このフェノクロ抽出時に １）等量のPCIを加えてvoltex→15000rpm RT 5min ２）上層を回収 ３）下層に再度TEを1/3量加えてvoltex→15000rpm RT 5min（逆抽出） としていますが、逆抽出時に一回目には見られなかった白い中間層が出ます。 逆抽出時は上層の濃度が一回目より低いので、下層から出てきやすいのかなと思っていますが この現象について何かご存知の方が居られましたら、教えていただければと思います。

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