初めて投稿させて頂く者です。胃上皮細胞(AGS)中のRho検出目的でCellBiolabsのキットを用いて下記の例外以外はプロトコール(字数の関係で投稿できませんが以下にURL挙げておきました。すいません)に忠実に実験をしましたがバンドは全く検出されませんでした。(キット付属のGTPase Immunoblot Controlにおいてもバンドは全く検出されず。)また、抗体が悪いのではと思いSantaCruz社のAntiRho抗体を使用してリプロ-ビングしましたがやはりだめでした。
どなたかこの実験に関して経験をお持ちの方でこういう所を注意すれば上手くいくなどのコツを教えて頂ける方がいらっしゃいましたらご指導を宜しくお願いします。
例外:@今回Rho activatorsを使用してない。Aメンブレンへの転写以降の操作はプロトコールでは室温で行うことと記載しているが1次抗体反応だけは4℃、O/Nで行った。BSDSPAGEのAPSは4℃で保存しておいた2カ月以上前の古いもの。
http://search.cosmobio.co.jp/cosmo_search_p/search_gate2/docs/CBL_/STA403.20090820.pdf |
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