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(無題) 削除/引用 No.1908-5 - 2010/01/15 (金) 13:21:06 - Boston ICC の場合、１次抗体反応は冷蔵庫でO/N、２次抗体反応は引き出しの中で３０分程度です。もし２次抗体の染まり具合が気になるのであれば、２次抗体に反応させたまま蛍光顕微鏡で観察することをお薦めしますーただレンズを汚さないように気をつける必要があります。私はせっかちなので、いつも１５分程度でチェックします。Invitrogen (Molecular Probe) の２次抗体であれば、まず染まっています。

(無題) 削除/引用 No.1908-4 - 2010/01/15 (金) 12:35:38 - わん 貴重な体験談などありがとうございました。 正直プロトコールには無いやり方だったので不安が多くありました。実際に冷暗の4℃保存で抗体反応を検討してみたいと思います！

(無題) 削除/引用 No.1908-3 - 2010/01/15 (金) 09:19:58 - へのへのもへじ degradetion起こすかもしれないので長くなるなら冷暗所においたら。

(無題) 削除/引用 No.1908-2 - 2010/01/15 (金) 08:39:39 - CJ それは重要な疑問点です。 抗体のインキュベーション時間は通常１次がovernight、２次が１時間とされていますが、それでは浸透が足らない場合が良くあります。 これは 固定条件 分子局在 その分子の量 界面活性剤の有無 切片の厚さ 浮遊法か貼り付け法か などの条件と関係しています。 私はある分子の免疫染色の際、１次抗体４８時間、２次抗体２４時間で行ってよい結果を得たことがあります。長時間反応の際には温度を４度で行う、希釈率を上げるなど条件を変える場合が良くあります。

Alexa fluor シリーズ 削除/引用 No.1908-1 - 2010/01/14 (木) 16:57:00 - わん 始めして、免疫細胞化学を行っている学部生なのですがふと疑問に思ったことがあります。 免疫細胞化学の際に一次抗体、二次抗体反応を行います。一次抗体反応はO/Nで行い、その後の二次抗体反応ではAlexa fluor488を使っています。一般的に二次抗体反応は1〜3hの範囲内で十分なのでしょうが、それ以上に行うと何かデメリットはあるのでしょうか？ ちなみに二次抗体反応は室温の暗室下で行うものとします。私の考えでは反応時間を長くしても大きな差はないように考えていて、場合によってはノンスペが出やすくなるのかもしれませんがその後のwashである程度防げる気もします。それよりも短時間の抗体反応で染まりきらないようなものもあるのではと疑問なのです。

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