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凍結細胞の融解,再凍結 トピック削除
No.1904-TOPIC - 2010/01/14 (木) 08:34:38 - ばば
質問させて頂きます.

実験で使う,ある細胞を凍結チューブに入れて液体窒素中で凍結保存しているのですが,次の実験ではそのチューブ中の半分の細胞で実験を行いたいと思っています.(高価なセルラインなので出来るだけ細胞をロスしたくないと思っています)

この場合,凍結チューブを融解して,
@使用分のみ分注して,すぐに残りを再度凍結しても細胞は傷まないでしょうか? もしくは,
Aチューブ中のすべての凍結細胞を一旦洗浄(メディウム加,遠沈)して再度新しいDMSOに入れた方が良いでしょうか?

もちろん融解再凍結することである程度は細胞の活性が落ちるのは理解しています.

どなたか同じ事を経験された方おられましたら,ご教授,ご意見よろしくお願いいたします.
 
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(無題) 解決済み 削除/引用
No.1904-5 - 2010/01/15 (金) 04:50:31 - ばば
皆様,ご教授ありがとうございました.

そうですね,一度適当な細胞を使って予備実験をしたいと思います.

ありがとうございました.

(無題) 削除/引用
No.1904-4 - 2010/01/14 (木) 11:33:40 - ~
難しいと思いますが…

大事な細胞なのでしたら、
適当な細胞を使って予備実験をされてはいかがでしょうか。
今日、明日で再凍結を行い、明日再凍結した細胞を撒いておけば、
週明けには結果が出ますよね。

うまくいったら、ぜひ結果を教えていただきたいです。

(無題) 削除/引用
No.1904-3 - 2010/01/14 (木) 09:22:27 - :;
NFさんの方法が一般的かと思われます。
ロスと言いますが、何が最終的に本当のロスとなるのか考えた方がいいと思います。

(無題) 削除/引用
No.1904-2 - 2010/01/14 (木) 08:47:12 - NF
細胞の融解・再凍結の経験は無いですが、一度全量を融解して培養し、その数日後(元気な状態になった後)、一部をストックし直すという方法はダメなのでしょうか?

凍結細胞の融解,再凍結 削除/引用
No.1904-1 - 2010/01/14 (木) 08:34:38 - ばば
質問させて頂きます.

実験で使う,ある細胞を凍結チューブに入れて液体窒素中で凍結保存しているのですが,次の実験ではそのチューブ中の半分の細胞で実験を行いたいと思っています.(高価なセルラインなので出来るだけ細胞をロスしたくないと思っています)

この場合,凍結チューブを融解して,
@使用分のみ分注して,すぐに残りを再度凍結しても細胞は傷まないでしょうか? もしくは,
Aチューブ中のすべての凍結細胞を一旦洗浄(メディウム加,遠沈)して再度新しいDMSOに入れた方が良いでしょうか?

もちろん融解再凍結することである程度は細胞の活性が落ちるのは理解しています.

どなたか同じ事を経験された方おられましたら,ご教授,ご意見よろしくお願いいたします.

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