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PCR cleanup トピック削除
No.1895-TOPIC - 2010/01/13 (水) 04:21:30 - らら
マニュアルでPCR cleanupをしたいのですが何かいい方法はありますか?
キアゲンのゲルエクストラクションキットで代用できるというのは本当ですか?
 
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(無題) 削除/引用
No.1895-6 - 2010/01/13 (水) 15:42:57 - パンタ
ありがとうございました

ちょっと試してみます。

(無題) 削除/引用
No.1895-5 - 2010/01/13 (水) 14:13:18 - おお
>[Re:4] パンタさんは書きました :

> おおさん
> > 飽和ウレアを等量いれて酸性酢酸ナトリウムでエタチンするてもあるかと思います
>
> これはタンパクの変性と考えてよろしいでしょうか?

変性とエタチンの時にタンパクを持ち込みにくいようです。
あまり細かい検証はしていませんが、感触として綺麗になってる
と思います。

> 酸性酢酸ナトリウムとは、pH5.2のことでよろしいですか?

そうです。

(無題) 削除/引用
No.1895-4 - 2010/01/13 (水) 12:52:33 - パンタ
もしPCR産物を制限酵素処理されるのであれば、フェノクロかガラスビーズみたいなので除タンパクしたほうがいいみたいです。体験談ですが、切り口の一本鎖が恐らくポリメラーゼによって平滑化されてしまったことがあります。

おおさん
> 飽和ウレアを等量いれて酸性酢酸ナトリウムでエタチンするてもあるかと思います

これはタンパクの変性と考えてよろしいでしょうか?酸性酢酸ナトリウムとは、pH5.2のことでよろしいですか?

(無題) 削除/引用
No.1895-3 - 2010/01/13 (水) 08:47:44 - おお
>[Re:1] ららさんは書きました :
> マニュアルでPCR cleanupをしたいのですが何かいい方法はありますか?

ゲル切出しが必要ないとお感じであれば、エタチンでも何とかなるのでは
とおもいます。きれいにしたいと言うのであれば飽和ウレアを等量いれて
酸性酢酸ナトリウムでエタチンするてもあるかと思います(昔はフェノクロしてましたけどこっちの方がステップがすくないです)。
特にプライマーが気になるのならG50などのゲル濾過のスピンカラムという
てもあるかと思います。

目的に合わせて使い分けると言いかとおもいます。


> キアゲンのゲルエクストラクションキットで代用できるというのは本当ですか?


試薬は一緒だったはずです。

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No.1895-2 - 2010/01/13 (水) 07:55:42 - 、メ、
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PCR cleanup 削除/引用
No.1895-1 - 2010/01/13 (水) 04:21:30 - らら
マニュアルでPCR cleanupをしたいのですが何かいい方法はありますか?
キアゲンのゲルエクストラクションキットで代用できるというのは本当ですか?

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