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ＰＭＡで分化したＴＨＰ−１のセルカウント 削除/引用 No.1864-4 - 2010/01/09 (土) 08:52:14 - 接着細胞 ご質問の答えにならないかもしれませんが、私はTHP-1細胞はプレートにまいた後、PMAを添加し、培養します。その後、接着を確認して試験試薬を添加し、さらに培養後、細胞を回収して、ウエスタンブロットやRT-PCRを行います。THP-1細胞にPMAを添加すると分化し、分化後は細胞は増えないものと考えています。（若干の時間差はあるかもしれませんが。）

(無題) 削除/引用 No.1864-3 - 2010/01/08 (金) 14:37:25 - mouse 回収前後でシャーレを顕微鏡で見て、細胞がちゃんと回収できているか見てみてください。 回収前から細胞がなければ培養条件の問題ではないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.1864-2 - 2010/01/07 (木) 11:09:43 - う トリプシンを入れて、細胞をはがしている最中のシャーレを見れば一目瞭然。 何が起こっているかわかる。 もうちょっと考えてみてもいいのでは？

ＰＭＡで分化したＴＨＰ−１のセルカウントについて 削除/引用 No.1864-1 - 2010/01/07 (木) 09:37:34 - ダイスケ 研究初心者のため質問させていただきます。 ＰＭＡ刺激によりマクロファージ様細胞に分化したＴＨＰ−１を用いた実験を行った際に、生細胞数のカウントを試みようとＰＢＳで洗浄後に0.05％トリプシンを用いて付着をはがれたのを位相差顕微鏡で確認してからトリパンブルーで染色後にカウントプレートにて観察したところプレート内に細胞がほとんどなく、唯一観察できたのが細胞の断片様のものだけでした。 ちなみに、ＰＭＡ刺激前の細胞数は1.0×10の5乗／mlです。 指導医に相談したところ、トリプシンにより付着ははがれてもその際に細胞膜が破れてしまった結果観測できなくなったのではないかという結論になったのです。 はたしてこの結論が正しいのか、またPMAで分化したTHP-1の生細胞数のカウント方法はどうしたらいいのか、この2点につきましてなにか御存知でしたら御教示いただけませんでしょうか？

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