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シークエンスでAがつづく配列を確認したいとき トピック削除
No.1833-TOPIC - 2009/12/28 (月) 16:57:36 - m
お世話になります。

ある遺伝子の解析を行っています。
Ex9の配列をみたいため、primerを設計し、遺伝子解析を行っていますが、
Fowardが何度やっても、読めません。riverseは読めます。

Ex9より50塩基前のイントロンから14個の塩基A(Poly A)がつづきます。その(PolyA)の前にPrimerを設定しているために、それ以降が読めない可能性があると考えていますが、こんな場合にきちんとシークエンスする方法はありますか?

Riverse もこのPoyA以降は波がぐちゃぐちゃになっています。(Exonは読めてますが・・・)

intronの中のことなので、Exonに異常なければ、問題ないとおもいますが、
このような場合どうせればよいかおしえてください。

たとえばAの14塩基内にさらにAの挿入があったり、した場合などはどうなるのかと思いまして・・・



配列は以下のような感じです。

(Foward Primer)TATCTTAAAA AAAAAAAAAA GGTCTATTGT CTTAATTATTCTATTTTGCT TTTTAG-(Exon9)-(iniron 101塩基)-(Riverse primer)
 
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ありがとうございます 削除/引用
No.1833-5 - 2010/01/04 (月) 12:45:42 - m
コメントありがとうございます。

シークエンスできれいな結果がでていれば、いいのですが・・・・
PolyAのある前or後はきれいにでてます。
PolyAの部分をうまく出す方法があるのでしょうか?

Primerの位置等、もう一度検討してみます。

(無題) 削除/引用
No.1833-4 - 2010/01/04 (月) 11:52:20 - SNP
Aがheteroで1塩基だけ欠失もしくは挿入されている可能性はいかがですか。逆から読んでも、同様にA以降が「ぐちゃぐちゃ」というか、1塩基ずつずれて重なっていればわかるかと思うのですが。

(無題) 削除/引用
No.1833-3 - 2009/12/28 (月) 19:21:37 - リバースだけ
わたしなら、データがクリアならリバースだけで満足します。

また、フォアードの位置を十分上流に動かしてはいかがですが?

(無題) 削除/引用
No.1833-2 - 2009/12/28 (月) 18:38:43 - おお
dGTP BigDye™ Terminator Cycle Sequencing FS Ready Reaction Kit

http://www.appliedbiosystems.jp/website/jp/product/modelpage.jsp?BUCD=130&PLCD=127&MODELCD=205&MODELPGCD=206

これを使うとGTリッチとか、2次構造が問題な時に
改善されることがあるようです。

シークエンスでAがつづく配列を確認したいとき 削除/引用
No.1833-1 - 2009/12/28 (月) 16:57:36 - m
お世話になります。

ある遺伝子の解析を行っています。
Ex9の配列をみたいため、primerを設計し、遺伝子解析を行っていますが、
Fowardが何度やっても、読めません。riverseは読めます。

Ex9より50塩基前のイントロンから14個の塩基A(Poly A)がつづきます。その(PolyA)の前にPrimerを設定しているために、それ以降が読めない可能性があると考えていますが、こんな場合にきちんとシークエンスする方法はありますか?

Riverse もこのPoyA以降は波がぐちゃぐちゃになっています。(Exonは読めてますが・・・)

intronの中のことなので、Exonに異常なければ、問題ないとおもいますが、
このような場合どうせればよいかおしえてください。

たとえばAの14塩基内にさらにAの挿入があったり、した場合などはどうなるのかと思いまして・・・



配列は以下のような感じです。

(Foward Primer)TATCTTAAAA AAAAAAAAAA GGTCTATTGT CTTAATTATTCTATTTTGCT TTTTAG-(Exon9)-(iniron 101塩基)-(Riverse primer)

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