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co-transfection トピック削除
No.1808-TOPIC - 2009/12/22 (火) 18:16:26 - とら
皆さんはco-transfectionする時、1welの細胞に同時に最大何種類の遺伝子を導入したことがありますか?transientで実験する場合です。stableを取りたいとかいうのではなくです。

今のところ私は3種類まではしたことがあるのですが、それ以上でしたことがある方がいらっしゃったり、見たことがあるとかいったものがあれば教えていただきたく質問してみました。
導入した遺伝子産物はきちんと発現するのか
発現量比はどうなるかとか。

宜しくお願いします。
 
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No.1808-7 - 2009/12/23 (水) 08:21:55 - とら
6種類や10種類とは・・・

なかなか多種類の遺伝子を同時にというのに、いかがなものかという思いがありましたが、
やってみるものいいかもと思いました。

くりさん

3種類の条件で言えば、免疫染色で確認した時、
発現している細胞はすべての遺伝子が発現していることが多いです。
量的な比はわかりませんが、ある1つの遺伝子だけが発現しているというものはあまり見られないようです。

3種類以上の場合はどうなのでしょうか・・・確認するのは面倒そうです。

(無題) 削除/引用
No.1808-6 - 2009/12/23 (水) 01:53:22 - くり
>[Re:5] in situさんは書きました :
> 10以上でやっています。
>
> 最初プロトコルを見たときは目を疑いましたが、一応全部入っている細胞は存在するようです。

リボフェクションなどはDNAのコンプレックスが取り込まれるので、一つの遺伝子が強く発現している細胞はほかの遺伝子もたくさん発現していると考えられると思うのですが、実際にもそうなりますか?

(無題) 削除/引用
No.1808-5 - 2009/12/23 (水) 01:17:19 - in situ
10以上でやっています。

最初プロトコルを見たときは目を疑いましたが、一応全部入っている細胞は存在するようです。

ただ、細胞をかなり選ぶのと、免染で観察するとかだと標的細胞が確認しづらいです。

(無題) 削除/引用
No.1808-4 - 2009/12/23 (水) 01:05:30 - モモ
私は6種類ですね。
すべて発現しましたよ。

(無題) 削除/引用
No.1808-2 - 2009/12/22 (火) 21:42:33 - おお
ライブラリーをトランスフェクションというのが
たまにありますけど、、、、、、

co-transfection 削除/引用
No.1808-1 - 2009/12/22 (火) 18:16:26 - とら
皆さんはco-transfectionする時、1welの細胞に同時に最大何種類の遺伝子を導入したことがありますか?transientで実験する場合です。stableを取りたいとかいうのではなくです。

今のところ私は3種類まではしたことがあるのですが、それ以上でしたことがある方がいらっしゃったり、見たことがあるとかいったものがあれば教えていただきたく質問してみました。
導入した遺伝子産物はきちんと発現するのか
発現量比はどうなるかとか。

宜しくお願いします。

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