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ありがとうございました。 削除/引用 No.1803-5 - 2010/01/01 (金) 04:43:34 - でら 勉強になりました。 返信ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.1803-4 - 2009/12/22 (火) 15:44:23 - おお >[Re:1] でらさんは書きました : > そしてＭａｘｉ−ｐｒｅｐの代わりに、いくつかのＭｉｎｉ−ｐｒｅｐを同じプレートからそれぞれのコロニーをピックアップして、それぞれのプラズミドを混ぜて１つにしても大丈夫なんでしょうか？ 混ぜる前にそれぞれ必要な活性を持っているとか確認しておいた方がいいんでない。 それか一つづつ使うとか。

(無題) 削除/引用 No.1803-3 - 2009/12/22 (火) 15:42:32 - おお 一つのコロニーには1種類のプラスミドがあるという コンセプトからきています。サブクローニングれべるでは 1種類といっていいです。 たまたまのコンタミとか、異常なクローンを除くという意味では、 完成しているプラスミドを導入した時もシングルから拾ったほうが 無難です。 サテライトに関しては理論上大丈夫です(絶対にサテライトとわかっているなら )。さわらない方が気持ちの上いいかと思いますけど、

(無題) 削除/引用 No.1803-2 - 2009/12/22 (火) 14:51:57 - ~ >シングルコロニーをピックアップする理由はなぜですか？　 単一のプラスミドが欲しいから。 >触ってしまったりすると問題がありますか？ 複数のベクターが取れてくるおそれがあります。 >それぞれのプラズミドを混ぜて１つにしても大丈夫なんでしょうか？ 異なるコロニー由来のベクターが同じ配列であれば、大丈夫でしょう。 ただ、ポイントミューテーションも含めて同じ配列だと確認するのは労力がかかると思います。 プラスミドを増やすためにというのが、 既に精製済みなどのベクターを増やすために再度トランスフォーメーションして増やす場合という意味であれば、 シングルコロニーを取る人と、10〜20個程度のコロニーを混ぜる人がいます。

プラスミド精製について 削除/引用 No.1803-1 - 2009/12/22 (火) 14:27:46 - でら プラズミドを増やすために、Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ後プレートの抗生物質の入ったＬＢ培地で大腸菌を培養した後、シングルコロニーをピックアップする理由はなぜですか？　 ピックアップのときに、近くのほかのコロニー（サテライトコロニーではなく）に触ってしまったりすると問題がありますか？ そしてＭａｘｉ−ｐｒｅｐの代わりに、いくつかのＭｉｎｉ−ｐｒｅｐを同じプレートからそれぞれのコロニーをピックアップして、それぞれのプラズミドを混ぜて１つにしても大丈夫なんでしょうか？

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