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SANTA CRUZの抗体について トピック削除
No.1795-TOPIC - 2009/12/21 (月) 14:18:21 - ビギナー
HeLa細胞を回収した後、ウエスタンブロットしました。(サンプル量0.5μg)
一次抗体はSANTA CRUZの「c-Src(B-12):sc8056」で、ブロッキング剤はスキムミルク0.3%を使用し、抗体の希釈率は1/500です。しかし、バンドがいくつか検出されました。c-Srcは約60kDaなのですが、そのあたりにもバンドが3本くらい検出されました。いったいどれがc-Srcなのでしょうか。教えていただけると幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.1795-3 - 2009/12/21 (月) 17:16:55 - ビギナー
ありがとうございます。
もう一度よく調べてみます。ブロッキングや抗体濃度についても検討してみようと思います。

(無題) 削除/引用
No.1795-2 - 2009/12/21 (月) 15:53:57 - おお
どれが本当のバンドかは、もっといろいろ調べて、同時にスペシフィックな
物をどうやって探すかよく考えてください。
それに対するコメントのまえにブロックングがちょっと弱すぎるような気がします。
3%ぐらいミルク入れて良いのでは、、、抗体の濃度も下げても良いと思います。
あまりにもあっちこっちにバンドが出るようでしたら。
まあそれからですね。
3っつともホントのバンドかもしれませんとしか現時点では答えようがありません.


あと0.5ugをSDSPAGEに乗せたということですが、標準のプロトコール
よりは少ないですね。そのくらいで出るならそれでもいいですけど
たいていその10倍以上はのせるかなぁ。のせすぎで、ノンスペが
防げないよりはましですけど。

SANTA CRUZの抗体について 削除/引用
No.1795-1 - 2009/12/21 (月) 14:18:21 - ビギナー
HeLa細胞を回収した後、ウエスタンブロットしました。(サンプル量0.5μg)
一次抗体はSANTA CRUZの「c-Src(B-12):sc8056」で、ブロッキング剤はスキムミルク0.3%を使用し、抗体の希釈率は1/500です。しかし、バンドがいくつか検出されました。c-Srcは約60kDaなのですが、そのあたりにもバンドが3本くらい検出されました。いったいどれがc-Srcなのでしょうか。教えていただけると幸いです。

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