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(無題) 削除/引用 No.1765-8 - 2009/12/17 (木) 20:20:46 - シグナル GSTベクター(pGEX, GST-目的蛋白)などをつかうと、融合蛋白として生産されるので、後の評価が簡単です。 まず、翻訳開始の問題がほぼ回避できます。 GST抗体が使え、目的蛋白がどれだけ分解されているか？知ることができます。可溶化しやすい。使う人が多いのでここでも質問しやすい。 特に理由がない限り、あなたの使っているベクターはなるべく避けたほうがいいかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.1765-7 - 2009/12/17 (木) 17:56:39 - TSSK ザンギさん 回答有難うございます。 ＞年寄りの繰り言ですが、… とんでもないです。有難うございます！ これからは区別を意識して取り組もうと思います。

(無題) 削除/引用 No.1765-6 - 2009/12/16 (水) 10:25:03 - ザンギ 年寄りの繰り言ですが、このような内容の文章の場合には転写と翻訳と 酵素活性発現と区別して記述されるとよろしいかと思います。 ある酵素遺伝子が発現したのなら、酵素活性が発現したともとれます。

そうですね 削除/引用 No.1765-5 - 2009/12/16 (水) 10:14:52 - TSSK インクルージョンに関しては説明ができると思いました。放射線耐性の一因としてその遺伝子が大量発現されているためなのかもしれません。 御回答ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.1765-4 - 2009/12/16 (水) 02:55:05 - おお 発現誘導に関しては、うんがよければCBB染色で見れるかもしれません。 確かに抗体で一度は確かめておきたいところですが、、、 そのような状態なら、インクルージョンボディーに移行しているか どうかは抽出の仕方で分かります。活性のない説明になるかもしれません。

… 削除/引用 No.1765-3 - 2009/12/15 (火) 21:43:43 - TSSK 稚拙な考察ですが，グラム陽性〈他菌〉，陰性（大腸菌）の違いもあり，転写サイクルに異常を来たしているなどが原因で，発現はしていないと考えています。 発現の有無を知る為にSDS-PAGEにてウェスタン→抗体発色で確認すれば解かるかなと考えていますが，何にせよ師匠の性格が難しく…学生の意見を聞いてくれない＋お金にケチ＋自分の意見ばっかり言う＋話を8割以上脱線させる方なんで…。正直言い訳にもできませんが。加えてお恥ずかしい限りです。。。

そのタンパクは 削除/引用 No.1765-2 - 2009/12/15 (火) 21:28:47 - ami 発現してるんですか、してないんですか

他菌由来の遺伝子を大腸菌内でタンパク発現評価 削除/引用 No.1765-1 - 2009/12/15 (火) 21:25:56 - TSSK ある放射線耐性菌（グラム陽性菌）の遺伝子を大腸菌ベクターpTrc99Aに組換え，その発現を大腸菌内で評価する実験を行っています。その遺伝子の活性を測定するキットで評価を行ったところ，その活性は見られませんでした。IPTGにおける発現誘導条件は0.5mM，1.0mM，1.5mM，2.0mMで15℃O/Nですが，いずれも活性を示しませんでした。 このような場合，どのような原因または改善策を考えれば良いでしょうか？知識の浅い質問でお恥ずかしい限りですが，回答宜しくお願いします。

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