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横から 削除/引用 No.1764-10 - 2009/12/17 (木) 02:52:24 - ぽすどく 　他の方が「なじませる」と言っているのは、凍らせる前に組織をOCT（などのコンパウンド）に漬ける時間を長く取るという意味だと思います。 　私は試したことがありませんが、人によっては、最初はOCTを薄めたものに浸漬、次に純すいなOCTに浸漬というステップを取る人もいるようです。（脱水系列のように段階的に置換していくということです） 　私はハエを切ったことがないので、上記はあくまで一般論ということです。

凍結切片 削除/引用 No.1764-9 - 2009/12/16 (水) 21:04:50 - ミミ 度々ありがとうございます。 ハエは成虫です。in situ hybridizationを行う予定なので、5マイクロ位で切片を作成したいと思っています。凍結切片の前は、パラフィン包埋も行ってきました。真空ポンプで固定液を浸透させたり、外皮を軟らかくするために次亜塩素酸を用いたりしましたが、やはり失敗しました。 宜しくお願い致します。

(無題) 削除/引用 No.1764-8 - 2009/12/16 (水) 19:07:29 - CJ ハエは幼虫ですか？成虫ですか？成虫だとキチン質が発達しているので、薄い切片の作成はより難しくなると思います。

凍結切片作成 削除/引用 No.1764-7 - 2009/12/16 (水) 14:43:28 - ミミ 皆様、ご回答ありがとうございます。 CMCは、OCTより試料を堅く保持することができると、論文に記載されていたため使用しました。温度についても、同様です。一度OCTで試してみましたが、やはり同じ結果でした。マウスではOCTを使用して、切片を作成することができました。 練習についてですが、４０個以上ブロックを切りました。OCTコンパウンドの場合、しばらく馴染ませるとのご回答がありましたが、しばらく時間を取るということでしょうか。私の場合、前日に包埋し、マイナス８０度で一晩保管します。試料は未固定で、採取したその日に包埋しております。 よろしくお願いいたします。

(無題) 削除/引用 No.1764-6 - 2009/12/16 (水) 14:25:33 - み ハエもCMCゲルも経験ないですが、OCTコンパウンドでは組織種類によりますがマイナス16-20度くらいが適当です。マイナス30度で良いのかな？と思いました。 ハエでないもっとポピュラーな（作成しやすいとされている）ものでは上手く切れる腕をお持ちなのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.1764-5 - 2009/12/16 (水) 13:51:52 - う どのくらい練習しましたか？

(無題) 削除/引用 No.1764-4 - 2009/12/16 (水) 11:22:19 - CJ それは、薄切していると、ブロックから体が取れてしまって一部しか切れない、ってことですか？ だとしたら、それはブロックと標本がなじんでいないのが原因ですね。わたしはＣＭＣゲルというものを使ったことがないですが、ＯＣＴコンパウンドの場合は試料を入れてからしばらくなじませてから凍結するのが良いです。

凍結切片の作成 削除/引用 No.1764-3 - 2009/12/16 (水) 10:32:07 - ミミ 大変分かりにくく、申し訳ありませんでした。 ハエ一匹を包埋しているのですが、試料の一部分だけ切れてしまいます。例えば、腹部の一部分だけ、といった具合です。 よろしくお願いいたします。

(無題) 削除/引用 No.1764-2 - 2009/12/16 (水) 08:16:29 - CJ こういう質問の仕方だと何が問題なのか良くわかりませんよ。もっと詳しくお願いします。 切片がどのような感じになってしまうのですか？

凍結切片の作成 削除/引用 No.1764-1 - 2009/12/15 (火) 21:17:45 - ミミ ハエを用いて、凍結切片を作成し、in situ hybridizationを行おうとしていますが、上手く切片を作成することができません。どの様な方法を用いれば上手に切片を作成できるのでしょうか。CMCゲルを用いて、ヘキサンードライアイスで急速凍結し、マイナス30℃で切っております。よろしくお願い致します。

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