同じような内容があったかもしれませんが、見つからなかったので質問させていただきます。
現在、大腸菌ＰＵＣ１８のプラスミドベクターに約６００ｂｐのインサートを組み込み、トランスフォーメーションを行うという実験をしています。
うまくセルに入っていれば、培地によるセレクションで白色コロニーができてＭｎ−ＳＯＤが発現するはずです。
しかし現在、青色コロニーが殆どといった状況です。
また、白色コロニーができていたとしても、そのコロニーを破砕してもＭｎ−ＳＯＤの活性がみられません。
ライゲーション産物を電気泳動した結果、うまくライゲーションができているものとベクターのみのものが半分ずつ位確認されました。
なのでライゲーションが失敗してるとは考えにくいのですが・・・。
解決策やアドバイスをお願いします。 |
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