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プライマーダイマーでしょうか トピック削除
No.1742-TOPIC - 2009/12/11 (金) 07:02:39 - ぽすどく
 PCRの初歩的な質問ですみません。

 ある遺伝子のRT-PCRを行ったところ、目的のバンド以外に、100bp以下に強いバンドが見られました。ごく単純に考えるとプライマーダイマーではないかと思うのですが。それを疑う理由が2点あります。

1:バンドの大きさが、プライマー二つを足した長さよりも若干大きそう。(あるいは勘違いかも)

2:TemplateなしでPCRを(なぜか)行ったところ、バンドは見えない。

 それでも、やはりプライマーダイマーでしょうか。

 ご教授いただけましたら幸いです。限られた情報ですみません。
 
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(無題) 削除/引用
No.1742-3 - 2009/12/11 (金) 07:45:47 - \
こんにちは。アガロースゲルでのチェックだと思いますが、100bp以下のサイズはあまり当てになりません。ゲルの濃度にもよりますが。
templateなしで出ないなら、ノンスペですかねぇ。先日、別トピにもありましたが、
http://genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgPcr
で、プライマーの配列を入れてみてはいかがでしょうか。
ノンスペだとしても、場合によっては、条件検討で改善するかもしれませんね(温度とかMgとか)。

(無題) 削除/引用
No.1742-2 - 2009/12/11 (金) 07:14:18 - おお
ノンスペかもしれません。
配列を確かめてみればいいかもしれませんが
大抵はそこまでしませんよね。

プライマーダイマーでしょうか 削除/引用
No.1742-1 - 2009/12/11 (金) 07:02:39 - ぽすどく
 PCRの初歩的な質問ですみません。

 ある遺伝子のRT-PCRを行ったところ、目的のバンド以外に、100bp以下に強いバンドが見られました。ごく単純に考えるとプライマーダイマーではないかと思うのですが。それを疑う理由が2点あります。

1:バンドの大きさが、プライマー二つを足した長さよりも若干大きそう。(あるいは勘違いかも)

2:TemplateなしでPCRを(なぜか)行ったところ、バンドは見えない。

 それでも、やはりプライマーダイマーでしょうか。

 ご教授いただけましたら幸いです。限られた情報ですみません。

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