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transwell assayについて トピック削除
No.1709-TOPIC - 2009/12/07 (月) 17:15:56 - AAA
卒業研究を行っている者です。
お恥ずかしい質問で恐縮ですが、transwell assayについて
お尋ねしたいことがあります。

transwell assayを用いて細胞の遊走能を調べているのですが、
遊走後の細胞を染色し、観察した結果、遊走にムラがあり、
メンブレン全体に、一様に細胞が遊走しません。

どのように実験系で行われていますでしょうか。
また、統計をとるには、視野中にどの程度細胞が遊走していればよいのでしょうか。イメージしていたよりも、遊走している細胞が少なくて困っています。


使用している細胞は、NIH3T3で、1.0×10^5個播種しています。
また、チャンバーの上室には5%FBS、チャンバー下室には20%FBSを
加え、約24時間インキュベート(37℃、5%CO2)しています。

ご教授お願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.1709-4 - 2009/12/07 (月) 22:46:06 - AAA
ぷうちゃんさん、mom-aさん、アドバイスありがとうございます。
御二方の御意見を参考に実験系をもう一度見直したいと思います。

また、質問させていただく事があるかもしれませんが、その時は、
どうぞ宜しくお願いします。

(無題) 削除/引用
No.1709-3 - 2009/12/07 (月) 19:37:13 - mom-a
5%と20%に特に理由があるのでなければ、ぷうちゃんさんのおっしゃるように上室のFBS濃度を下げてみるのが良いと思います。NIH3T3で24時間処理なら0%FBSで大丈夫かと思いますが、細胞によっては0.5%とか1%とか生存に必要な最低濃度を加える必要はあります。

あと、ポアサイズが細胞に適しているかどうかも重要かと思います。

>統計をとるには、視野中にどの程度細胞が遊走していればよいのでしょうか。

どの程度細胞が遊走しているかと、統計処理とは無関係です。「統計処理をする価値のある、ちゃんとしたデータかどうか」という意味でしたら、文献などを参考にされると良いと思います。

(無題) 削除/引用
No.1709-2 - 2009/12/07 (月) 17:32:18 - ぷうちゃん
たかが4倍の濃度勾配でゆうそうに違いでますかね?

一方を0にしては如何?

transwell assayについて 削除/引用
No.1709-1 - 2009/12/07 (月) 17:15:56 - AAA
卒業研究を行っている者です。
お恥ずかしい質問で恐縮ですが、transwell assayについて
お尋ねしたいことがあります。

transwell assayを用いて細胞の遊走能を調べているのですが、
遊走後の細胞を染色し、観察した結果、遊走にムラがあり、
メンブレン全体に、一様に細胞が遊走しません。

どのように実験系で行われていますでしょうか。
また、統計をとるには、視野中にどの程度細胞が遊走していればよいのでしょうか。イメージしていたよりも、遊走している細胞が少なくて困っています。


使用している細胞は、NIH3T3で、1.0×10^5個播種しています。
また、チャンバーの上室には5%FBS、チャンバー下室には20%FBSを
加え、約24時間インキュベート(37℃、5%CO2)しています。

ご教授お願いします。

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