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(無題) 削除/引用 No.1704-4 - 2009/12/08 (火) 04:51:44 - あかね 抗体反応時にDAPIを加えても問題ありません。 多くの方がそうされていると思います。 DAPIの試用濃度とはGoogleで検索すればでてくるでしょうね。 基本的にDAPIがDNAに結合すると、結合していないFreeのDAPIにくらべ200倍（確か）の蛍光を発するようになります。なのでVectorshieldのように、mounting mediumにDPAIが入ったまんまで、その後の洗浄もなしでも、十分高いコントラストが得られます。 ちなみに細胞がマイコプラズマにコンタミしていると、細胞しつまでDAPIで染色されてしまいますので、そういう可能性も考えてみては。

DAPI入り封入剤 削除/引用 No.1704-3 - 2009/12/08 (火) 03:32:42 - ぽすどく 　VectashieldのDAPI入り封入剤（cat#：H-1200)を最近はずっと使用しています。封入剤なので、その後に洗浄したりはしませんが、バックグラウンドで困ったことはありません。

(無題) 削除/引用 No.1704-2 - 2009/12/07 (月) 08:29:34 - CJ ＤＡＰＩを滴下したあとに洗浄するべきでしょう。 私は２次抗体と一緒に入れたりします。

DAPIの使用方法 削除/引用 No.1704-1 - 2009/12/06 (日) 22:30:46 - ホウホウ 現在日本BD falconのカルチャースライド(4 well)で細胞培養をしております。培養後は免疫染色でDAPIも使うのですが、以前は丸型カバーガラス上に細胞を生やしそれにDAPIを直接1滴たらして封入していました。今回のカルチャースライドの場合はDAPIの量が相対的に多いのか蛍光観察時にバックグランドまで青色で映ってしまいます。 この問題に関してはDAPIの滴下量を調節すればいいだけなのかもしれませんが、希少なサンプルのため検討するには少々怖いというのと、二次抗体反応時にDAPIを混ぜて核も一緒に染色してしまうという方法があるというのを知ったからです。 後者の方法に関しては一般的に行なわれているものなのでしょうか？私は細胞培養の経験があまり無いのでご存知の方がいらしたらお願いします。二次抗体反応は1 wellに対して約1mlの反応液を入れ1〜2h(室温)で反応させています。その後はPBS(−)で3回のwashをおこなってから封入をしています。二次反応時におけるDAPIの適用法、ならびにその後のwashの有無など出来るだけ詳しく知識のある方がいたらお願いいたします。

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