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siRNA導入用のリポフェクトアミンの細胞への影響 トピック削除
No.1701-TOPIC - 2009/12/06 (日) 16:28:11 - ぽにょ
現在ヒトの末梢血単核細胞（PBMC)にsiRNAを導入し，タンパク発現をノックダウンさせる実験を行っています。刺激を添加し，その活性が落ちることを確認したいのですがどうも未刺激（Medium Only)のものでも活性が出てしまうのです。これはリポフェクトアミンの影響なのでしょうか？それともsiRNA自体の影響なのでしょうか？
これまで刺激時は、siRNAやリポフェクトアミンを含んだ培地を代えずに行っていました。

ちなみにリポフェクトアミンはInvitrogenのRNAimaxです。
　
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(無題) 削除/引用
No.1701-3 - 2009/12/07 (月) 10:17:55 - ぽにょ
>>TK−１ さん

そうですね、しっかり条件検討をしてからやろうと思います。ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.1701-2 - 2009/12/06 (日) 23:30:41 - TK−１
>これはリポフェクトアミンの影響なのでしょうか？
siRNA無しで、lipofectamineだけでどうなりますか？

>それともsiRNA自体の影響なのでしょうか？
スクランブルsiRNAでどうなりますか。


> これまで刺激時は、siRNAやリポフェクトアミンを含んだ培地を代えずに行っていました。
換えてみたらどうですか？

コントロールのない実験をしても意味がありません。何かをする前にちゃんと計画を立ててください。

siRNA導入用のリポフェクトアミンの細胞への影響 削除/引用
No.1701-1 - 2009/12/06 (日) 16:28:11 - ぽにょ
現在ヒトの末梢血単核細胞（PBMC)にsiRNAを導入し，タンパク発現をノックダウンさせる実験を行っています。刺激を添加し，その活性が落ちることを確認したいのですがどうも未刺激（Medium Only)のものでも活性が出てしまうのです。これはリポフェクトアミンの影響なのでしょうか？それともsiRNA自体の影響なのでしょうか？
これまで刺激時は、siRNAやリポフェクトアミンを含んだ培地を代えずに行っていました。

ちなみにリポフェクトアミンはInvitrogenのRNAimaxです。
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